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血清藥理學(xué)是日本學(xué)者HirokoIwama［1］在1984年第一屆和漢醫(yī)藥學(xué)會上首次提出的。1988年，日本國東京都醫(yī)院的田代真一［2］正式提出了“血清藥理學(xué)”的概念。它是指將中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口給動物灌服一定時間后采集動物血液，分離血清，用含有藥物成分的血清進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的一種半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法。

1990年以后，血清藥理學(xué)開始在我國受到從事中藥研究人員的關(guān)注。該方法主要針對中藥及其復(fù)方復(fù)雜多樣的化學(xué)成分特點(diǎn)，用含藥血清代替煎劑或粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，它克服了中藥粗制劑直接進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)，其結(jié)果的可信度明顯優(yōu)于中藥粗制劑直接用于體外實(shí)驗(yàn)。而且它結(jié)合了現(xiàn)代化學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理、臨床等學(xué)科，血清藥理研究方法不斷地被應(yīng)用于一些中藥及西藥的藥理學(xué)研究，并取得了一定的進(jìn)展。本文就血清藥理學(xué)在我國的研究進(jìn)展、應(yīng)用、評價(jià)及研究展望做一綜述。

1血清藥理學(xué)的產(chǎn)生

隨著中藥復(fù)方藥理研究的逐步深入，要求研究者把研究水平提高到細(xì)胞、亞細(xì)胞甚至分子水平，不少科研需要在離體實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行。離體試驗(yàn)的開展，使中藥復(fù)方的研究必須借助一個載體。1984年，在第一屆和漢醫(yī)藥學(xué)會上，日本學(xué)者HirokoIwama提出了給動物灌服中藥，在一定的時間里，用含藥血清代替煎劑或粗提物進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的設(shè)想。其后，日本國立京都醫(yī)院的田代真一，又于1988年和1992年兩次撰文，提出了“血清藥理學(xué)”和“血清藥化學(xué)”的概念（見圖1），自此有關(guān)中藥血清藥理學(xué)的研究逐步展開。

2血清藥理學(xué)在我國的研究現(xiàn)狀

2．1血清藥理學(xué)的時效關(guān)系研究

利用含藥血清來評價(jià)藥效，何時能夠采集到含藥量較高的血清，找出給藥后的最佳采血時間以避免由于藥效物質(zhì)代謝消耗或尚未吸收造成的假陰性結(jié)果，是非常重要的問題。由于血清中確切的藥效成分并不清楚，因此往往以藥效指標(biāo)來評判給藥時間和采血時間的優(yōu)劣，即“時效關(guān)系”的研究。研究者們對不同給藥時間和采血時間的藥效進(jìn)行了研究。

給藥時間上，目前常用的方法有：1次給藥，或間隔2～4h給藥，或每天1～3次，連續(xù)3～10d。王寧生［3］認(rèn)為，根據(jù)藥動學(xué)理論，固定給藥時間的間隔，相同劑量多次重復(fù)給藥后，血漿藥物濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度，并將在此濃度下不同采血時間取得的含藥血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，均表現(xiàn)較高且相似的藥理作用強(qiáng)度。孟李等［4］對復(fù)方丹參血清對中性粒細(xì)胞釋放活性氧的影響進(jìn)行研究，探討含藥血清制備方法的實(shí)驗(yàn)，也證實(shí)了此觀點(diǎn)。說明同一給藥方案連續(xù)數(shù)日給藥較1次給藥有明顯差異，可能與藥物誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性生物活性物質(zhì)有關(guān)［5］。此結(jié)論目前已形成共識。

采血時間上，較理想的采血時間應(yīng)在血藥濃度的高峰期。蒙一純等［6］認(rèn)為，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動物消化生理特點(diǎn)和中藥吸收、生物轉(zhuǎn)化特點(diǎn)確定采血時間范圍是十分合理的。如大鼠一般1～2h可達(dá)血藥濃度峰值，此時血清即為含藥血清；時間延長將有部分藥物成分發(fā)生轉(zhuǎn)化，成為藥物代謝血清。一般采血時間多集中在末次給藥后30min至3h間。由于中藥復(fù)方給藥后，不同藥物達(dá)峰時間不同，故對于采血時間很難有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。如周明眉等［7］發(fā)現(xiàn)，頭風(fēng)飲給藥后30min的抑制血小板釋放5－HT比給藥后其它時間作用強(qiáng)大，提出給藥后30min為最佳采血時間。李儀奎［8］通過對96個藥物達(dá)峰時間統(tǒng)計(jì)后提出藥后1～2h采血較為合理。包金鳳等［9］認(rèn)為應(yīng)對不同時間分別采血進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，將不同時間的含藥血清進(jìn)行比較后再確定采血時間是最可靠和科學(xué)的方法。但是，李儀奎等在對大量的中藥藥物代謝動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行分析后，提出一種通行的方案，即每天給藥2次，連續(xù)3d，末次給藥后1h采血，稱為“通法”［10］。這有利于節(jié)約財(cái)力、人力和時間。

2．2血清藥理學(xué)的量效關(guān)系研究

給藥劑量目前尚無定論，其量的大小主要取決于：一是動物的給藥量，在一定程度上，給藥量愈大則血清中的含藥量愈高；二是培養(yǎng)體系或反應(yīng)體系中的含藥血清濃度，血清濃度愈高則藥量愈大。但因含藥血清加入體外反應(yīng)體系后，濃度被稀釋，使反應(yīng)體系藥物濃度達(dá)不到在體條件下的藥物濃度。王力倩等［11］提出用給藥劑量等于臨床用量乘以動物等體表面積系數(shù)、再乘以培養(yǎng)基內(nèi)血清稀釋度的公式計(jì)算制備含藥血清的給藥劑量較為合理。研究表明，含藥血清的量效是由動物給藥量和血清濃度共同決定的，由于培養(yǎng)體系中血清濃度的增減是有限的（血清濃度過高會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，在研究含藥血清抑制細(xì)胞增殖或促細(xì)胞凋亡作用時，有可能得出假陽性結(jié)果）。楊彥芳等［12］認(rèn)為應(yīng)以臨床等效劑量為基準(zhǔn)，注意藥物濃度，對于過高劑量（如臨床等效劑量的5倍、10倍）所得到的陽性結(jié)果，在作結(jié)論時應(yīng)慎重或留有余地。故相對固定含藥血清濃度，通過改變動物給藥量來調(diào)整藥物血清的含藥量，是一種較為現(xiàn)實(shí)的方法。

3血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法在我國科學(xué)研究中的應(yīng)用

3．1血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法在中藥新藥研制中的應(yīng)用

目前，中藥的開發(fā)和研制主要是尋找藥物的有效成分或有效部位、制備精煉的中藥制劑、提高臨床療效和降低毒副作用。血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的建立，使這一目的的實(shí)現(xiàn)變得更為切實(shí)可行。主要表現(xiàn)在以下幾個方面：①在體外藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)一步驗(yàn)證和評價(jià)藥物的療效，運(yùn)用含藥血清對有效藥物和／或藥物的有效成分進(jìn)行初步篩選；②血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)、中藥分析化學(xué)、中藥藥動學(xué)，尤其是中藥胃腸藥動學(xué)、中藥血清藥動學(xué)、中藥證治藥動學(xué)等相結(jié)合，將有利于藥物有效成分或部位的尋找和鑒定；③對藥物的制劑工藝進(jìn)行比較和篩選；④對藥物的作用機(jī)理做更深入的研究。

3．2血清藥理學(xué)在方劑藥動學(xué)（PK）的應(yīng)用

黃席等將證治方劑藥動學(xué)中的復(fù)方方劑藥動學(xué)修正為復(fù)方效應(yīng)成分動力學(xué)假說［13］。其方劑血清靶成分也是探索復(fù)方的藥效成分物質(zhì)基礎(chǔ)的［14］。不僅如此，還研究靶成分在機(jī)體內(nèi)的藥時曲線、數(shù)學(xué)模型，其PK參數(shù)可直接指導(dǎo)臨床用藥，進(jìn)行治療藥物監(jiān)測（TDM），從而有力地提高療效，因此是單純方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)探索的深入和發(fā)展。而血清藥理學(xué)［15］研究過程是服用方劑后進(jìn)行含藥血清的體外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，通過探討與方劑療效相關(guān)的成分間接地闡明藥效物質(zhì)。

3．3血清藥理學(xué)方法在腫瘤研究中的應(yīng)用

離體實(shí)驗(yàn)是研究中藥抗腫瘤機(jī)理的重要方法之一。對于抗腫瘤復(fù)方中藥來說，在其配伍的多種中藥的血清中的有效成分的定量分析檢測尚未見突破性的進(jìn)展情況下，血清藥理學(xué)方法是抗腫瘤復(fù)方研究的一條行之有效的途徑。

目前，此法被廣泛用于中藥抗腫瘤機(jī)理研究。研究層面包括腫瘤細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)、腫瘤細(xì)胞凋亡及分化的誘導(dǎo)、腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)及端粒酶活性調(diào)控等方面。

3．4血清藥理學(xué)方法在神經(jīng)藥理學(xué)研究中的應(yīng)用

神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物研究涉及到許多的體外模型，運(yùn)用這些模型有助于快速、高效地篩選出治療疾病的藥物。合理使用血清藥理學(xué)方法，結(jié)合疾病的體外模型，可以幫助我們對中藥復(fù)方進(jìn)行分析，可較好地反映中藥藥效。

4對血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的評價(jià)

4．1血清藥理學(xué)的優(yōu)勢

血清藥理學(xué)因其方法學(xué)上的特點(diǎn)使其在中醫(yī)學(xué)的研究中已顯示出一定的優(yōu)勢：①從中藥復(fù)方本身來講，可克服體外實(shí)驗(yàn)不能直接觀察到的復(fù)方經(jīng)體內(nèi)胃腸吸收、生物轉(zhuǎn)化后的綜合整體藥理效應(yīng)；②從方法學(xué)上解決了中藥復(fù)方直接應(yīng)用于離體實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn)，使中醫(yī)藥研究能在離體實(shí)驗(yàn)中直接與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合，從而推動中醫(yī)藥現(xiàn)代化的進(jìn)程；③對含藥血清的成分進(jìn)行藥效、藥動學(xué)研究并與原復(fù)方粗提物進(jìn)行比較，可以發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，為探討中藥復(fù)方作用規(guī)律提供新思路；④可以用來驗(yàn)證一些中醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)理論。如君臣佐使、中藥配伍理論及一些中醫(yī)基礎(chǔ)理論的實(shí)際價(jià)值，有助于為中醫(yī)理論的現(xiàn)代化研究提供依據(jù)。

4．2血清藥理研究方法存在的不足

4．2．1在血清藥理研究方法的理論依據(jù)方面：該方法建立的理論依據(jù)不足主要包括：①從胃腸吸收的中藥有效成分在體內(nèi)是進(jìn)入血漿，而非血清；②凝血過程有一系列酶生成，同時刺激白細(xì)胞釋放溶酶，這些酶可能降解某些中藥成分；③凝血酶刺激血小板與白細(xì)胞釋放大量生物活性物質(zhì)；④凝血過程伴有纖溶、補(bǔ)體、激肽等系統(tǒng)活化；⑤制備與滅活血清過程會導(dǎo)致中藥成分與中藥介導(dǎo)體內(nèi)釋放物質(zhì)損失。使用HPLC－MS指紋圖譜分析與抗白血病細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明利用血清藥理方法可能帶來錯誤結(jié)論。應(yīng)加強(qiáng)中藥多層次半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究，其中血漿藥理方法可能能避免血清藥理方法的弊?。?6］。

4．2．2在血清供體動物的選擇方面：按照血清藥理學(xué)的初衷，為較準(zhǔn)確地再現(xiàn)在體實(shí)驗(yàn)的整個過程，離體組織（細(xì)胞）的供體動物和含藥血清的供體動物須有同質(zhì)性。除在種屬、年齡、性別、體質(zhì)量等方面外，供體動物是否造模即是否處于相同的生理病理狀態(tài)也是不容忽視的影響因素：①不同生理、病理狀態(tài)對血清中含藥成分的影響?？茖W(xué)家們進(jìn)行了多項(xiàng)比較性研究，揭示出在不同生理、病理或遺傳背景的基礎(chǔ)上，不同人群對同一種藥物的藥代動力學(xué)參數(shù)有不同的特點(diǎn)；②不同證型對藥物濃度影響。樊亞萱等［17］根據(jù)中醫(yī)辨證論治理論提出的證治藥動學(xué)假說，認(rèn)為：同一藥物不同“證”的藥代動力學(xué)參數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著差別，明顯影響藥物療效和毒性反應(yīng)，經(jīng)用辨證施治后，差別可消失或減輕。

4．2．3在動物病理模型的制備方面：大多數(shù)血清藥理學(xué)研究者均采用正常動物的含藥血清。但是，中藥復(fù)方進(jìn)入生理狀態(tài)下動物機(jī)體與進(jìn)入病理狀態(tài)下的動物，其體內(nèi)過程是不完全一致的。其消化吸收，體內(nèi)分布，生物轉(zhuǎn)化及排泄均可能有差異，也可能產(chǎn)生不同的內(nèi)源性活性成分。如果研究的是方藥的治療效應(yīng)，有學(xué)者認(rèn)為，應(yīng)當(dāng)采用相應(yīng)的動物病理模型制備含藥血清，會有較強(qiáng)的說服力［18］。

4．2．4在中藥作用機(jī)理方面：中藥作用機(jī)理十分復(fù)雜。絕大部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均揭示出中藥含藥血清具有一定的藥效，但也有一些研究結(jié)果是非常有趣味。例如某些中藥的粗提物無效，而其含藥血清卻有效；而另一些中藥粗提物有效，但其含藥血清卻無效。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果從一個側(cè)面提示，某些中藥是原藥成分起作用，而有些中藥則可能是其藥物成分在機(jī)體作用下形成的代謝產(chǎn)物或藥物的多種成分相互作用后產(chǎn)生的新的生理活性物質(zhì)在起作用。

5展望

目前，血清藥理學(xué)已經(jīng)應(yīng)用到越來越多的研究領(lǐng)域中，為中藥復(fù)方的研究方法開辟了研究思路，拓寬了研究領(lǐng)域，能較為客觀真實(shí)地闡明中藥的藥效和作用機(jī)制，并在一定程度上揭示中藥復(fù)方在胃腸內(nèi)代謝過程中活性成分的轉(zhuǎn)化和改變，提高了體外實(shí)驗(yàn)的可信性和可靠性。但由于血清藥理學(xué)方法在我國研究起步較晚，許多方面還需要經(jīng)驗(yàn)和數(shù)據(jù)的累積，且在某些實(shí)驗(yàn)，如凝血、纖溶等研究中采用血清藥理學(xué)研究方法不適宜。因此，其局限性不容忽視。血清藥理學(xué)若能與血漿藥理學(xué)、藥動學(xué)、血清藥化學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)結(jié)合研究，則有助于研究的規(guī)范與深入，必將加速中藥走向現(xiàn)代化的進(jìn)程。

【摘要】血清藥理學(xué)是指用含有藥物成分的血清施加于體外實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系的一種半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法。目前已經(jīng)廣泛運(yùn)用于對中藥復(fù)方的藥理作用和作用機(jī)理的探討。本文論述了血清藥理學(xué)方法研究的現(xiàn)狀及進(jìn)展，并結(jié)合作者的思路，對中藥藥理學(xué)的研究進(jìn)行展望。

【關(guān)鍵詞】血清藥理學(xué)；中藥研究；半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)；評價(jià)；展望