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VX2腫瘤是由shope病毒誘發(fā)的兔可移植性腫瘤，可接種到不同器官而成兔移植瘤模型［1］。它具有生長速度快、血供豐富、較早出現(xiàn)壞死和轉(zhuǎn)移等特點(diǎn),是應(yīng)用廣泛的大動物腫瘤模型。我們對兔VX2肝癌模型的傳代方式進(jìn)行了一些改進(jìn),并采用螺旋ct掃描技術(shù)檢測瘤灶并評價腫瘤生長情況。

1材料與方法

1.1材料

日本大白兔30只,體重2.5kg～3.0kg,雌雄不限,由西安交通大學(xué)動物實驗中心提供，VX2腫瘤兔由第四軍醫(yī)大學(xué)提供。PQ-6000超高檔螺旋CT，18G穿刺活檢切割針。造影劑用歐乃派克。

1.2方法

待荷瘤兔腫瘤形成直徑約2cm大小時完整切取，在冰塊上去除包膜及壞死組織，剪取腫瘤邊緣生長旺盛部分置于Hanks液中。盡量剪碎約1mm，制成瘤細(xì)胞懸液［2］。接種兔麻醉狀態(tài)下CT引導(dǎo)18G穿刺針進(jìn)入右腎下級，注入瘤細(xì)胞懸液0.3ml。手術(shù)操作于1.5h內(nèi)完成。實驗動物肌肉注射青霉素40萬U，連續(xù)3d。腫瘤移植后第7天、第9天、第11天、第13天、第15天、第17天、第19天、第21天、第23天、第25天、第27天，實驗動物在耳緣靜脈麻醉后行螺旋CT平掃及增強(qiáng)掃描。增強(qiáng)CT造影劑選用歐乃派克，劑量5ml，經(jīng)耳緣靜脈以0.5ml/s速度注射［3］。掃描條件：電壓為120kV，電流為200mA，螺距1.25，層距5mm,層厚5mm。觀察腎臟及腎內(nèi)腫瘤的大小、形態(tài)特點(diǎn),用所測數(shù)據(jù)計算腫瘤體積和腫瘤生長率(TGF=a2b2~a1b1/a1b1×100%)。觀察腎門及腹主動脈旁淋巴結(jié)變化，是否出現(xiàn)癌栓及液化壞死等。于每次CT掃描后即刻活殺一只兔，切取原發(fā)瘤灶及可疑淋巴結(jié)、肝臟、肺臟轉(zhuǎn)移組織進(jìn)行光學(xué)顯微鏡檢查。

2結(jié)果

2.1腫瘤成瘤率

本組30例全部成瘤。術(shù)后螺旋CT平掃,腎下極瘤灶及穿刺道未見明顯出血征象。觀察期間荷瘤兔生長正常,未見感染及其他并發(fā)癥。植瘤后2周~3周，腫瘤體積增長穩(wěn)定，邊緣完整，形態(tài)規(guī)則，密度均勻，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，是進(jìn)行實驗研究的最佳時段。

2.2腫瘤螺旋CT表現(xiàn)

腫瘤種植灶在1周左右時較小,CT難以顯示或僅顯示點(diǎn)狀低密度灶,強(qiáng)化不明顯。2周時瘤灶直徑達(dá)1cm～2cm,平掃呈低密度或等密度,邊界清楚,密度較均勻,周圍未見水腫形成(見圖1)。強(qiáng)掃描呈明顯強(qiáng)化,其中環(huán)形強(qiáng)化18例,環(huán)形壁厚,較均勻,未見明顯壁結(jié)節(jié)形成,中間可見未強(qiáng)化區(qū),未見明確腫瘤血管(見圖2)。較均勻強(qiáng)化12例;3周瘤灶明顯增大,直徑在3cm～5cm之間,螺旋CT平掃可見密度不均勻,17例出現(xiàn)壞死,且壞死明顯,中間可見囊變區(qū)呈水樣密度;增強(qiáng)掃描呈不規(guī)則環(huán)形強(qiáng)化,強(qiáng)化與2周時掃描比減低,環(huán)形壁較薄,無壁結(jié)節(jié)形成;9例可見腎內(nèi)多個大小不一的結(jié)節(jié)狀轉(zhuǎn)移灶,增強(qiáng)特點(diǎn)與主病灶相似,病變?yōu)榈兔芏?與周圍增強(qiáng)腎臟組織形成明顯對比。4例有腎門及腎主動脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

2.3荷瘤兔存活及病檢

荷瘤兔自然存活時間為接種后6周～7周,其中3例存活50d。荷瘤兔死亡前表現(xiàn)明顯惡病質(zhì),體重下降,拒食,活動減少,呼吸困難。活檢可見腫瘤體積巨大,周圍廣泛浸潤、粘連,腎內(nèi)、腹壁、腹膜后可見多個大小不一轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié);腎門、主動脈旁、肝門部、大網(wǎng)膜、腸系膜可見多個腫大淋巴結(jié),部分融合;15例可見肝臟多發(fā)轉(zhuǎn)移,脾臟未見轉(zhuǎn)移灶。24例有雙肺彌漫粟粒樣轉(zhuǎn)移灶，14例有血性胸腔積液，有大葉性肺實變表現(xiàn)2例。腫瘤大體呈灰白色,質(zhì)硬,切面呈魚肉樣，有包膜,巨大腫塊切開可見有果醬樣液體流出,有空洞形成,壁不規(guī)則，瘤體中央因缺血壞死而成豆渣樣。鏡下表現(xiàn)為鱗癌。

3討論

以往腎癌模型大多建立在裸鼠移植癌，該方法操作復(fù)雜,成瘤率低。VX2腫瘤是由Shop病毒在兔皮膚誘發(fā)的鱗癌經(jīng)數(shù)十次傳代而建立。兔腎VX2腫瘤模型,傳代簡易、方便、生物學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,性質(zhì)明確。該腫瘤雖不是腎臟原發(fā)性腫瘤,但具有轉(zhuǎn)移瘤的一切特點(diǎn),腫瘤雖是來源于皮膚的鱗癌,但腫瘤血供豐富,生長速度快,易出現(xiàn)壞死［4］,表現(xiàn)與人類原發(fā)性腎癌類似,是臨床研究肝臟腫瘤的理想模型。國內(nèi)外有較多報道,有細(xì)胞懸液經(jīng)皮穿刺直接種植法,剖腹直視下瘤組織塊直接種植法等，采用腫瘤細(xì)胞或懸液直接種植成功率可達(dá)100%,但較費(fèi)時、費(fèi)力。采用腿部皮下接種成瘤并傳代作為瘤種進(jìn)行腎臟接種雖然成功率不及前者,但較簡單、經(jīng)濟(jì)，成功率高。我們采用在螺旋CT透視下穿刺活檢的方法進(jìn)行腫瘤的活體傳代。在腎臟種植腫瘤時進(jìn)針較深,將組織塊用導(dǎo)絲推至腎內(nèi),隨后用少量明膠海綿以同樣的方法封堵針道,拔針后并壓迫片刻。一方面減少瘤塊逆出致腹腔種植,另一方面盡量使腫瘤種植在腎臟下極深部。其定位準(zhǔn)確,成功率較高,本組成功率為100%。操作簡單,動物創(chuàng)傷小,并發(fā)癥少,本組無一例動物因感染或出血死亡。

螺旋CT掃描檢測兔VX2腎癌病灶顯示清晰,對瘤灶的變化可進(jìn)行動態(tài)觀測,避免了實驗動物必須開腹或處死才能觀測瘤灶。我們經(jīng)過反復(fù)摸索得出電壓：120kV，電流：200mA，螺距：1.25，層距：5mm,層厚：5mm的掃描條件。在CT平掃上瘤灶呈低密度,少數(shù)為等密度,當(dāng)有壞死時為明顯低密度;增強(qiáng)掃描瘤灶呈明顯強(qiáng)化;與人腎癌CT表現(xiàn)相似。在腫瘤的種植時間上以2周~3周左右的瘤灶顯示清晰,表現(xiàn)典型。1周左右的瘤灶常較小,難以觀測到。而3周以上的瘤灶大多出現(xiàn)明顯的壞死且遠(yuǎn)處出現(xiàn)多發(fā)轉(zhuǎn)移灶。CT表現(xiàn)的低密度區(qū),與尸檢發(fā)現(xiàn)腫瘤液化壞死是吻合的。表明腫瘤生長迅速,惡性程度高。實驗中我們還觀測到通過動物多次傳代的腫瘤會增加免疫原性［5］，較早出現(xiàn)壞死且壞死明顯,所以應(yīng)盡量避免反復(fù)種植傳代。