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作者：崔京遠馬紅崔秋娟周東風(fēng)林惠忠

【摘要】目的：探討力爾凡對惡性腹腔積液的臨床治療價值及對端粒酶活性的影響。方法：48例惡性腹腔積液患者分為治療組和對照組。治療組（28例）采用力爾凡聯(lián)合順鉑腹腔內(nèi)注入，對照組（20例）單用順鉑腹腔內(nèi)注入。分別在治療前，治療后1周、2周及3周，觀察腹腔積液消失情況，評定療效，采用半定量TRAP銀染法檢測腹水細胞端粒酶活性。結(jié)果：治療組臨床治療有效率89.3%，對照組為60.0%（P＜0.01），隨著治療時間的延長，端粒酶活性逐漸下降。結(jié)論：力爾凡聯(lián)合順鉑治療惡性腹腔積液具有協(xié)同作用，其對端粒酶活性的抑制可能參與了以上機制，檢測端粒酶活性可作為評價其療效的敏感生物學(xué)指標。

【關(guān)鍵詞】力爾凡・順鉑・腹水・端粒，末端轉(zhuǎn)移酶

TheeffectofLifeincombinedwithcisplatinonmalignantascitesandtelomeraseactivity

【ABSTRACT】Objective:Tostudytheclinicalvalueandtelomeraseactivityofmalignantascitestreatedbylifeincombinationwithcisplatin.Methods:48patientswithmalignantascitesweredividedrandomlyintotwogroups.Treatmentgroupof28casesweretreatedwithlifeinandcisplatin,controlgroupof20casesweretreatedwithcisplatinalone.TelomeraseactivitywasdetectedbysemiTRAPassaybeforetreatment,atthefirstweek,thesecondweekandthethirdweekaftertreatment,respectively.Results:theeffectiveratesoftreatmentgroup(89.3%)wasmuchhigherthanthatofcontrolgroup(60%),P＜0.01.Telomeraseactivitydecreasedintimedependentmanner.Conclusions:CombiningLifeinandcisplatinwasveryeffectivetomalignantascitespartlybydecreasingtelomeraseactivity.DetectionoftelomeraseactivityaftertreatmentwithLifeinandcisplatincouldbeusedasasensitivemarker

【KEYWORDS】Lifein・Cisplatin・Ascites・Telomerase

惡性腹腔積液是晚期惡性腫瘤患者的常見并發(fā)癥之一，嚴重影響病人的生存質(zhì)量，縮短生存時間，有效的控制惡性腹腔積液是腫瘤綜合治療中的重要組成部分。近年來，生物治療及生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用為惡性腹腔積液的治療提供了新的方法。晚近研究表明，端粒酶在惡性腫瘤細胞中高表達［1~3］，而且是鑒別良惡性腹腔積液的重要生物學(xué)標志物［4］。本研究采用力爾凡聯(lián)合順鉑腹腔內(nèi)注射治療惡性腹腔積液，探討其臨床療效及對端粒酶活性的影響。

1材料與方法

1.1臨床資料2005年3月~2006年2月48例惡性腫瘤病人，其中胃癌18例，結(jié)腸癌10例，肝癌12例，惡性腹膜間皮瘤2例，胰腺癌6例，每例均經(jīng)病理學(xué)或細胞學(xué)證實，且超聲顯示中等到大量腹腔積液。全部患者治療前血常規(guī)，心、肝、腎功能均正常，KSP評分＞50分。上述病例隨機分為治療組（腔內(nèi)注射順鉑加力爾凡）28例，對照組（單純順鉑）20例。兩組病人在性別、年齡、臨床分期及病種無統(tǒng)計學(xué)差異。

1.2主要試劑和藥物半定量TRAP試劑盒：含細胞裂解液、反應(yīng)液（含正向引物）、Tag酶、逆向引物、溴酚藍二甲苯青雙色上樣緩沖液等。-80℃保存，使用時按說明書操作并作局部改進。力爾凡為長春力爾凡藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，順鉑為濟南齊魯制藥廠產(chǎn)品。

1.3治療方法治療組：治療前行腹腔穿刺術(shù)，抽取腹腔積液1500~2000ml，然后將力爾凡20~30mg，順鉑40~60mg，地塞米松15mg，利多卡因5ml加生理鹽水40~80ml溶解，注入腹腔。注藥后囑患者變換體位，以使藥物與腹膜充分接觸。用藥當日靜脈補液1500~2000ml以減輕順鉑之腎毒性，每周重復(fù)1次，3~4次為1個療程，對照組：除不用力爾凡外，其他與治療組相同。

1.4臨床療效觀察根據(jù)WHO對腫瘤藥物治療評定標準評定。完全緩解（CR）：腹腔積液完全吸收持續(xù)1個月以上。部分緩解（PR）：腹腔積液吸收超過50%，持續(xù)1個月以上。穩(wěn)定（SD）：腹腔積液吸收不足50%，持續(xù)1個月以上。惡化（PD）：腹腔積液無變化或增加。有效率以CR+PR計算。

1.5端粒酶活性檢測分別于治療前，治療后1周，2周，3周，常規(guī)腹腔穿刺抽取腹水50ml，3000r/min離心10min，棄上清，以1%曲拉通破壞紅細胞，冷PBS洗滌2次；立即加裂解液10μl，冰浴30min，4℃15000r/min離心10min，吸取上清保存于-80℃。以TRAP銀染法檢測端粒酶活性。

每組實驗均同時設(shè)陽性及陰性對照（陽性對照為SGC7901人胃癌細胞株，陰性對照為上清液65℃10min以滅活RNA酶）。所用正向引物（TS）序列為5’AATCCGTCGAGCAGAGTT3’，逆向引物（CX）序列為5’CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTA3’。

1.6端粒酶活性的半定量分析端粒酶活性的強度表現(xiàn)為間隔6bp梯度帶數(shù)目及灰度強弱的不同，電泳結(jié)果經(jīng)SmartView生物電泳圖像分析系統(tǒng)掃描并貯存圖像，以對照組的端粒酶活性作為100，同時計算各實驗組的相對端粒酶活性。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS11.5統(tǒng)計軟計進行統(tǒng)計學(xué)差異分析。

2結(jié)果

2.1療效比較治療組與對照組在治療后腹水均有不同程度的減少，兩組治療結(jié)果比較見表1。治療組有效率89.3%，明顯高于對照組的60.0%（P＜0.01）。表1治療組與對照組療效比較組別例數(shù)CRPRSDPDCR+PR（%）治療組288173089.3*對照組20486260.0*P＜0.01VS對照組

2.2力爾凡聯(lián)合順鉑對腹水惡性腫瘤細胞端粒酶活性的影響分別檢測不同治療時間的端粒酶活性，治療組在治療后1周，平均端粒酶活性下降約50%，與陽性對照相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；至第2周時端粒酶活性繼續(xù)下降，治療3周后端粒酶活性消失，與陰性對照相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。對照組在治療后不同時間端粒酶活性也有不同程度的下降，說明順鉑對端粒酶活性的抑制作用較順鉑聯(lián)合力爾凡為弱，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（圖1）。

3討論

惡性腹腔積液是晚期惡性腫瘤的常見并發(fā)癥，適當治療可明顯延長生存期，緩解癥狀。目前聯(lián)合化療方案有多種，總體療效并不理想［5］。近年來生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑應(yīng)用研究較多，特別是與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用治療惡性腹腔積液，取得較好療效。力爾凡是一種鏈球菌制劑，是用現(xiàn)代生物技術(shù)從溶血性鏈球菌中提取純化而得到的一組分子量為70kD的α甘露聚糖肽類物質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)，它可使癌細胞染色體斷裂，使癌細胞p53基因激活上調(diào)，提高癌細胞DNA甲基化酶活性，抑制癌細胞轉(zhuǎn)錄，抑制癌細胞DNA聚合酶活性而直接殺傷癌細胞；其次可通過宿主介導(dǎo)的間接作用，主要是活化中性粒細胞和單核細胞，使腫瘤細胞黏附，并誘導(dǎo)多種細胞因子的表達，起到抑制和殺瘤的作用［6］。文獻報道其治療惡性滲出明顯緩解率達60%，而單用順鉑總有效率40%~60%。如將兩種藥物聯(lián)合，力爾凡除本身的抑癌作用外，還起到增敏作用，使化療效果倍增。本治療組有效率達89.3%，明顯高于單用順鉑組（P＜0.01）。端粒酶作為目前具有特異性和敏感性的惡性腫瘤標志物，不但用于惡性腫瘤的早期診斷，腫瘤的預(yù)后判斷，而且用于治療效果的評價［7~9］。Liu等進行了良惡性腹水端粒酶活性的檢測，結(jié)果表明，檢測腹腔積液脫落細胞端粒酶活性對腹腔積液定性診斷具有重要意義，可作為良惡性腹腔積液的鑒別診斷指標［7］。本研究將力爾凡聯(lián)合順鉑治療晚期惡性腫瘤腹腔積液，不但明顯緩解臨床癥狀，而且隨著治療時間的延長，腹水端粒酶活性逐漸降低，提示力爾凡與順鉑治療惡性腹腔積液有協(xié)同作用，其對端粒酶活性的抑制作用可能參與了以上機制，推測與腫瘤細胞染色體斷裂有關(guān)。因此檢測端粒酶活性可作為評價其療效的敏感生物學(xué)指標。

參考文獻

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