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摘要用hplc法測(cè)定貫葉連翹根、莖、葉、花、果中金絲桃素的含量；結(jié)果表明花中含量最高，莖中含量甚微。
貫葉連翹HypericumperforatumL.為藤黃科金絲桃屬植物，藥理實(shí)驗(yàn)證明其主要成分金絲桃素具有抗病毒、抗炎及抗腫瘤作用，對(duì)人體激活白細(xì)胞的免疫功能有抑制作用〔1〕。目前以金絲桃素含量為貫葉連翹定量指標(biāo)。我們建立了HPLC法，并測(cè)定了幾個(gè)產(chǎn)區(qū)的貫葉連翹原植物根、莖、葉、花、果中金絲桃素的含量，以指導(dǎo)藥材的采收和金絲桃素生產(chǎn)原料的質(zhì)量控制。
1儀器與試藥
1.1儀器HPLC儀(美國(guó)Perkin-Elmer公司)；LC-295型紫外可見檢測(cè)器；Series200泵；Plus-1022色譜工作站。
1.2試藥乙腈(色譜純)；金絲桃素對(duì)照品(Sigma公司，批號(hào)97071503)；貫葉連翹(Hypericum.PerforatumLinn)全草(7月下旬至9月上旬采集)。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱：Nova-PakODS(4.6mm×200mm)；流動(dòng)相：甲醇∶乙腈∶0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(400∶100∶100)；流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：588nm；Range：0.05AUFS；進(jìn)樣量：10μl，金絲桃素保留時(shí)間11min。
2.2供試液的制備將原藥材各部位樣品分別粉碎，使全部過60目篩。精密稱取約1g，用甲醇-吡啶(90∶10)20ml超聲提取1h，放冷至室溫，最后定容于25ml量瓶中，用0.45μm濾膜濾過，濾液即為供試液。精密稱取金絲桃素對(duì)照品，用吡啶-甲醇(1∶9)溶解并稀釋為0.01mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。
2.3提取溶媒的選擇金絲桃素為多酚羥基雙蒽酮類，在甲醇中加入一定吡啶使提取溶劑呈弱堿性，有利于金絲桃素的溶出。
2.4提取時(shí)間對(duì)同一藥材樣品分別加入吡啶-甲醇溶液20ml超聲提取15，30，45，60，90min后測(cè)定，表明45min以后金絲桃素的含量測(cè)定結(jié)果趨于穩(wěn)定(15%)，考慮超聲時(shí)間過長(zhǎng)溶劑升溫，故采取超聲1h為宜。
2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別吸取0，2.5，5，10，15，20μl的金絲桃素對(duì)照品溶液進(jìn)樣，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量回歸得方程：y＝38707x－8804，r＝0.9991。
同法取供試品溶液測(cè)定。結(jié)果見表1。取同一藥材測(cè)定9次，RSD＝3.30%。
表1不同產(chǎn)地貫葉連翹各部位的含量
產(chǎn)地花葉莖根果實(shí)全草甘肅文縣0.0720.0460.002未檢出0.028甘肅康縣0.0900.035未檢出未檢出0.039湖南龍山0.0580.0370.007未檢出0.0190.019貴州畢節(jié)0.0570.0360.003未檢出0.0090.022陜西丹鳳0.0860.033未檢出未檢出0.018湖北恩施0.0850.040未檢出未檢出0.015四川達(dá)川0.0500.035未檢出未檢出0.018
2.6加樣回收試驗(yàn)精密稱取藥材粉末3份，分別加入不同量的金絲桃素對(duì)照品，按樣品測(cè)定方法操作，金絲桃素平均回收率為100.3%，RSD＝4.17%。
3討論
①金絲桃素含量測(cè)定可用薄層掃描法〔2〕或HPLC法，熒光檢測(cè)并配合梯度洗脫〔3〕。本文建立的HPLC法使用紫外檢測(cè)器，且為等度洗脫，較上述方法簡(jiǎn)便、實(shí)用，具有較強(qiáng)的可操作性。
②從含量測(cè)定結(jié)果可知：金絲桃素在花中含量最高，葉次之，果實(shí)含量低，莖中含量甚微，根中未檢出金絲桃素。故應(yīng)在花期采收地上部分，棄去莖干；藥材質(zhì)量以花葉多者為優(yōu)。
參考文獻(xiàn)
〔1〕EzioBombardelli,PaoloMorazzoni.Hypericumperforatum.Fitoterapia,1995(1):43
〔2〕KartnigThandGbelI.Determinationofhypericinandpseudohypericinbythinlayerchromatography-den-sitometry.JChromotogr,1992(609):423
〔3〕GiuseppeMicali,FrancescoLanuzza,PaolinaCurro.Highperformanceliquidchromatographicdeterminationofthebiologicallyactiveprinciplehypericininphytotherapeaticvegebrextractsandalcoholicbeverages.JChromotogr,1996(731):336新晨