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【摘要】目的用hplc法測定雙黃消炎片中鹽酸小檗堿的含量。方法HPLC用外標一點法，DiamonsilODS1C18柱，乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀溶液（35:65）為流動相，流速為1.0ml/min，λ=265nm。結果鹽酸小檗堿在13.525～108.20μg/ml范圍內呈良好線性,回歸方程為Y=63204.63X+4501.15，r=0.9993，平均加樣回收率99.8%，RSD為1.59%（n=5）。結論方法簡便、準確，專屬性強，測定結果重復性好，為雙黃消炎片中鹽酸小檗堿的定量分析提供了科學有效的方法。
【關鍵詞】雙黃消炎片鹽酸小檗堿HPLC
【Abstract】ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofBerberinehydrochlorideinshuanghuangxiaoyanPianbyHPLC.MethodsUsingDiamonsilODS1C18Column,acetonitrile-0.033mol/LPotassiumPhosphateMonobasicacid（35：65）asthemobilephase,detectionwavelengthas265nmandflowratewas1.0ml/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearatarangeof13.525～108.20μg/mlfortheBerberinehydrochlorideandlinearequationwasY=63204.63X+4501.15r=0.9993.Theaveragerecoverywas99.8%andtherelatedstandarddeviation（RSD）was1.59%（n=5）.ConclusionThismethodwassimpleandaccurateandproper,whichcanbeprovideforscientificquantitativeanalysismethodofBerberinehydrochlorideinshuanghuangxiaoyanPianandthereduplicationoftheresultwasgood.
【Keywords】shuanghuangxiaoyanPian；Berberinehydrochloride；HPLC
雙黃消炎片收載于部頒藥品標準中藥成方制劑第二冊中，功能主治：消炎，用于咽喉疼、腹瀉、痢疾、慢性痢疾。處方由三顆針、黃芩組成，原標準中只鑒別項檢查，沒有含量控制項。為了更好地控制雙黃消炎片的質量，筆者對雙黃消炎片處方進行了分析，本處方中的君藥三顆針為小檗科植物，小檗堿為三顆針的主要成分之一。為更好控制產品質量，提高藥品質量標準，參照文獻資料與《中國藥典》2005年版一部復方黃連素片項下含量測定方法，對雙黃消炎片中鹽酸小檗堿的含量測定進行了實驗研究［1，2］。采用高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿含量，方法簡便快速，穩定可靠，專屬性強。
1儀器與試藥
儀器：高效液相譜儀：SPD-10A日本島津；紫外分光儀：上海康化生化儀器制造廠；超聲波清洗器：SK3200H上海科導超聲儀器有限公司。試藥：鹽酸小檗堿對照品（批號110713-200208，供含量測定用）由中國生物制品檢定所提供,其他試劑均為分析純；雙黃消炎片（批號：20070501、20070502、20070503）由河南百年康鑫藥業有限公司提供,上市藥品：通化某藥業有限公司。
2方法與結果
2.1色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀溶液（35:65）為流動相；檢測波長為265nm；流速為1ml/min；柱溫為室溫。理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于3000。
2.2溶液的制備對照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。供試品溶液的制備：取本品20片，研細，取0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理30min（功率：135W，頻率：59kHz）,放冷，加甲醇至刻度，混勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液1ml置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，即得。
2.3陰性樣品的測試取缺三顆針的樣品，按供試品制備法制備陰性樣品后測定，在鹽酸小檗堿相應位置無峰出現，說明陰性樣品的其他成分無干擾。見圖1～3。圖1鹽酸小檗堿對照品色譜圖圖2雙黃消炎片色譜圖圖3陰性樣品色譜圖2.4線性關系的考察取鹽酸小檗堿對照品適量,加甲醇配制不同濃度的對照品溶液，分別為13.525μg/ml、27.05μg/ml、54.10μg/ml、81.15μg/ml、108.20μg/ml，照上述色譜條件各進樣10μl測定峰面積（結果見表1），以峰面積積分值為縱坐標，以不同濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程Y=63204.63X+4501.15r=0.9993（n=5）,表明鹽酸小檗堿在13.525～108.20μg/ml之間呈良好的線性關系。表1線性關系的考察
2.5精密度試驗精密吸取對照品溶液（54.1μg/ml）進樣量10μl，連續進樣6次，記錄峰面積（結果見表2），測定結果RSD為1.26%，表明精密度良好。表2精密度試驗
2.6重現性試驗取本品（20070501）20片，稱取平均處重，研細，取6份，每份0.5g，精密稱定，照供試品溶液制備方法，制成供試品溶液，照上述色譜條件進行試驗，進樣10μl，測定每份鹽酸小檗堿含量（結果見表3），結果RSD為1.54%，重現
性良好。表3重現性試驗
2.7穩定性試驗取同一供試品溶液（批號：20070501），分別在0、2、4、6、8h進樣10μl，測定鹽酸小檗堿峰面積（結果見表4），RSD為3.29%（n=5）。表明制備的供試品溶液在8h內穩定。表4穩定性試驗
2.8加樣回收率試驗精密稱取已知含量的同一批號供試品（批號：20070501）5份，取樣量為0.25g，精密稱定,分別加入濃度為2.861mg/ml的對照品溶液1ml，按照供試品溶液制備方法，制備供試品溶液，進樣量10μl，測定鹽酸小檗堿含量（結果見表5），平均回收率為98.2%，RSD為1.59%（n=6）。表5加樣回收率試驗
2.9樣品測定按照供試品溶液制備方法對3批產品進行測定，測定結果見表6。表6含量測定結果
3討論
3.1樣品每片含三顆針以鹽酸小檗堿（C20H18ClNO4）計，均不少于3.0mg，由于各地三顆針藥材的差別較大，因此暫規定：本品每片含三顆針以鹽酸小檗堿（C20H18ClNO4）計，不得少于3.0mg。
3.2參考《中國藥典》2005年版一部復方黃連素片項下含量測定方法所用的流動相，分別采用乙腈：0.033mol/L磷酸二氫鉀（40：60、25：75、35：65）為流動相，進行試驗，結果以乙腈－0.033mol/L磷酸二氫鉀（35：65）為流動相所得色譜圖分離效果及出峰時間較為合適。因此選擇流動相為乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀（35：65）。
【參考文獻】
1孫雪妹，楊明華，戴影秋.良園枇杷葉膏中鹽酸麻黃堿的HPLC測定.中國醫藥工業雜志，2006，37（11）：768-769.
2國家藥典委員會.中國藥典,2005年版一部.北京：化學工業出版社，2005，534.新晨