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【摘要】目的：建立腸寧?kù)`膠囊含量測(cè)定方法。方法：采用hplc法測(cè)定。色譜柱：KromasilC18柱，流動(dòng)相：甲醇—水(60：40)，檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm，柱溫：40℃，流速:0.81ml/min。結(jié)果：異補(bǔ)骨脂素進(jìn)樣量在0.026～0.312μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998)；平均加樣回收率為98.6529%，RSD為1.43%(n=6)。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便易行，專(zhuān)署性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，可用于腸寧?kù)`膠囊的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；腸寧?kù)`膠囊/化學(xué)合成；異補(bǔ)骨脂素/標(biāo)準(zhǔn)
腸寧?kù)`膠囊是我校正在研究開(kāi)發(fā)的一種新藥，它是由補(bǔ)骨脂(鹽)160g，白術(shù)(炒)160g，山藥(炒)120g，茯苓120g，五倍子80g，秦皮80g，肉豆蔻(煨)80g，木香(煨)40g，吳茱萸40g,炙甘草40g等10味藥組成的復(fù)方制劑，可用于治療慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎,效果良好。采用高效液相色譜法對(duì)腸寧?kù)`膠囊中的異補(bǔ)骨脂素進(jìn)行含量測(cè)定，以控制其質(zhì)量，使各批制劑之間的藥效穩(wěn)定，現(xiàn)報(bào)道如下。
1材料
Waters600E雙泵頭柱塞往復(fù)泵，Waters2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，Chromstation數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào):0738-200108)；腸寧?kù)`膠囊(自制，批號(hào)：20050312，20050314，20050318)；缺補(bǔ)骨脂的陰性樣品(自制)；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其它試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱：KromasilC18色譜柱(Φ4.6mm×250mm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm；流動(dòng)相：甲醇水(60：40)；柱溫：40℃；流速：0.8ml/min；理論板數(shù)按異補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)分別不低于2000。
2.2溶液的制備
2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含26μg的溶液，即得(10℃以下保存)。
2.2.2供試品溶液的制備取腸寧?kù)`膠囊內(nèi)容物約0.35g，精密稱(chēng)定,置50ml容量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理30min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
2.2.3測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液5μl與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
2.3線性關(guān)系考察分別精密吸取上述對(duì)照品溶液1、3、6、9、12μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，回歸方程為Y=9114067X-6562.64，r=0.9998，結(jié)果表明異補(bǔ)骨脂素進(jìn)樣量在0.026-0.312μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.4精密度試驗(yàn)取同一腸寧?kù)`膠囊供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定異補(bǔ)骨脂素的含量，結(jié)果異補(bǔ)骨脂素平均含量為0.723μg/粒，RSD為1.795，表明異補(bǔ)骨脂素的精密度良好。
2.5穩(wěn)定性考察分別取放置4、8、12、16、20、24h的同一對(duì)照品溶液與供試品溶液,測(cè)定異補(bǔ)骨脂素含量，以考察其穩(wěn)定性，結(jié)果對(duì)照品溶液峰面積積分值RSD為1.21%，供試品浴液峰面積積分值RSD為2.47%，表明對(duì)照品溶液與供試品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批腸寧?kù)`膠囊樣品(批號(hào)為20050212)適量，6份，精密稱(chēng)定，同法制備供試品溶液，依法測(cè)定異補(bǔ)骨脂素的含量，結(jié)果異補(bǔ)骨脂素平均含量為0.729mg/粒，RSD為1.22%，表明異補(bǔ)骨脂素的重復(fù)性良好。
2.7加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，加入到已測(cè)知異補(bǔ)骨脂素含量的腸寧?kù)`膠囊(異補(bǔ)骨脂素含量為0.2143%，即0.729mg/粒)中，同法操作制備供試品溶液,測(cè)定異補(bǔ)骨脂素的含量，計(jì)算回收率?；厥章?實(shí)測(cè)值-樣品中含量對(duì)照品加入量×100%，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果No取樣量注：χ=98.6529%RSD=1.43%2.8陰性對(duì)照試驗(yàn)為進(jìn)一步考察實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及含量測(cè)定方法的可行性和專(zhuān)屬性，取缺補(bǔ)骨脂的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。精密吸取10μl注入液相色譜儀，按上述方法測(cè)定，結(jié)果表明補(bǔ)骨脂陰性對(duì)照品的色譜圖在異補(bǔ)骨脂素相應(yīng)的保留時(shí)間附近無(wú)干擾峰，證明本法具有良好的專(zhuān)屬性。
2.9樣品測(cè)定結(jié)果按上述方法測(cè)定樣品3批，樣品含量見(jiàn)表2。表2腸寧?kù)`膠囊中異補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定結(jié)果
3討論
3.1腸寧?kù)`膠囊供試品溶液制備方法的選擇在預(yù)試驗(yàn)中，分別采用了加熱回流和超聲波提取的方法以正交試驗(yàn)的形式對(duì)腸寧?kù)`膠囊中的異補(bǔ)骨脂素的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果加熱回流和超聲波提取在含量上沒(méi)有明顯的區(qū)別，考慮到操作上的方便選擇超聲波提取的方式，根據(jù)正交試驗(yàn)的結(jié)果確定了腸寧?kù)`膠囊供試品溶液的制備方法為取腸寧?kù)`膠囊內(nèi)容物約0.35g，精密稱(chēng)定,置50ml容量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理30min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度。
3.2條件的確定取異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品在流動(dòng)相溶液中進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)掃描，可知最大吸收波長(zhǎng)為245nm，因此選擇腸寧?kù)`膠囊供試品溶液的測(cè)定波長(zhǎng)為245nm。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［1-3］，先后
選擇了甲醇水，乙腈水，甲醇0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，測(cè)定結(jié)果表明以甲醇水(60：40)為該制劑的最佳流動(dòng)相組成。經(jīng)過(guò)方法學(xué)考察，證明該方法穩(wěn)定，具有良好的專(zhuān)署性，可以作為腸寧?kù)`膠囊質(zhì)量控制方法之一。
【參考文獻(xiàn)】
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