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鬼針草為菊科植物鬼針草屬多種植物的全草，藥材資源豐富，廣泛分布于熱帶及溫帶地區(qū)，遍布全國各地，極易采集。根據(jù)文獻(xiàn)報道，鬼針草屬多種植物含有槲皮素成分［1］；槲皮素具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、鎮(zhèn)痛、抗血小板聚集、擴(kuò)張冠狀動脈等作用［2～4］?！吨袊幍洹飞形词蛰d鬼針草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?！顿F州中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.、鬼針草BidensbipinataLinn.的干燥全草，《湖南中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.的干燥地上部分，《甘肅中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1995年收載鬼針草BidensbipinataLinn.，《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1990年收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.、白花鬼針草BidenspoilsaL.var.radiataSch.-Bip.的干燥全草，河南中藥材標(biāo)準(zhǔn)1991年收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.、鬼針草BidensbipinataLinn.、金盞銀盤Bidensbiternata(Lour.)Merr.EtSherff.的干燥全草，《上海中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載鬼針草BidensbipinataLinn.（婆婆針）的干燥地上部分［5］。從國內(nèi)地方標(biāo)準(zhǔn)收載情況可以看出全國各地均有廣泛的應(yīng)用，入藥部位為全草或地上部分，本實驗擬采用RP-HPLC法建立鬼針草屬藥材中槲皮素的含量測定方法并比較鬼針草不同藥用部位和不同種中槲皮素的含量，為該類藥材的傳統(tǒng)入藥部位是否正確和質(zhì)量評價提供參考依據(jù)。

1儀器與材料

美國waters2695高效液相色譜儀，VWD檢測器；鬼針草采自云南紅河州、廣西，經(jīng)劉圓副教授和戴斌教授鑒定為菊科鬼針草屬植物狼杷草BidenstriparticaLinn.，白花鬼針草BidenspilosaL.var.ratiataSch-Bip.，婆婆針BidensbipinataLinn.，三葉鬼針草BidenspilosaLinn.的干燥全草；槲皮素（批號081-9304，中國藥品生物制品檢定所，含量測定用）；甲醇為色譜純；水為二次重蒸水；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件KrosmasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm），柱溫30℃，流動相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（41∶59），檢測波長360nm，流速1ml·min-1。槲皮素峰可以達(dá)到基線分離，峰形對稱，分離度好，按照槲皮素峰計，理論塔板數(shù)不應(yīng)低于5000。見圖1～8。

圖1槲皮素對照品色譜圖（略）

圖2三葉鬼針草（云南產(chǎn)）根色譜圖（略）

圖3三葉鬼針草（云南產(chǎn)）莖色譜圖（略）

圖4三葉鬼針草（云南產(chǎn)）葉色譜圖（略）

圖5狼杷草色譜圖（略）

圖6白花鬼針草色譜圖（略）

圖7婆婆針色譜圖（略）

圖8三葉鬼針草色譜圖（略）

2.2供試品溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇配置成0.04mg·ml-1的溶液。

2.2.2樣品溶液的制備稱取鬼針草藥材粉末（過40目篩）約1.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中加入甲醇-25﹪鹽酸溶液（4∶1）25ml，稱定重量，加熱回流1h，取出，冷卻至室溫，用上述混合溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，過0.45μm的微孔濾膜，作為樣品溶液。

2.3線性關(guān)系的考察分別精密量取上述對照品溶液0.5，2，4，8，20μl，在上述色譜條件下測定峰面積。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=3×106X-33404，R2=0.9999(n=5)。結(jié)果表明槲皮素在0.02～0.80μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.4精密度實驗精密吸取對照品溶（0.04mg·ml-1）10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得峰面積的RSD為0.97%（n=6）。結(jié)果表明精密度良好。

2.5穩(wěn)定性實驗精密量取樣品溶液10μl，分別于0，2，4，6，8h測定。按照槲皮素對照品峰面積計算RSD為0.6%（n=6）。結(jié)果表明樣品溶液在配制后8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6重復(fù)性實驗取同一批樣品溶液，精密稱取6份，按“2.2”項下方法制備樣品溶液，按照“2.1”項下色譜條件測定槲皮素的含量，RSD為1.6%（n=6），表明重復(fù)性良好。

2.7回收率實驗精密稱取9份已知含槲皮素量的藥材粉末0.25g，依次加入低、中、高3種質(zhì)量濃度槲皮素對照品溶液，按“2.2”項下方法制備樣品溶液，按照“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果平均回收率為99.87%，RSD為0.9%（n=9）。

2.8樣品含量測定按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按照“2.1”項下方法測定，不同部位測定結(jié)果見表1，不同種測定結(jié)果見表2。

表1三葉鬼針草不同部位中槲皮素的含量（略）

表2鬼針草屬不同種中槲皮素的含量（略）

3討論

實驗曾考察了甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）；甲醇-0.4%磷酸溶液（45∶55）；甲醇-0.4%磷酸溶液（40∶60）；甲醇-0.4%磷酸溶液（41∶59）為流動相，流速1ml·min-1，柱溫30℃，以KromasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm）為分析柱。本實驗以甲醇-0.4%磷酸溶液（41∶59）為流動相，槲皮素峰可以達(dá)到基線分離，峰形對稱，分離度好。本法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可以作為控制鬼針草屬藥材質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一。

就化學(xué)成分槲皮素的角度考慮，不同部位以葉入藥最好，其次是莖，因此建議鬼針草屬藥材以地上部分為好；就不同種而言，以白花鬼針草槲皮素含量最高，質(zhì)量最好。