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作者：高玉海許慧春鄧儉姜俊清趙綏林何秉章單位：黑龍江大學(xué)伊春分校伊春南岔林業(yè)局伊春林業(yè)學(xué)校東北林業(yè)大學(xué)哈爾濱園林研究所東北林業(yè)大學(xué)

苦白蹄〔Laricifomesofficinalis(Vill.exFr.)KotlabaetPouzar〕(別名藥用擬層孔菌、奎寧菌、落葉松層孔菌)廣泛分布于北溫帶。在俄羅斯和中國(guó)危害落葉松(Larixspp.),引起落葉松立木和木材的褐色腐朽。在歐洲和美洲,還可危害冷杉(Abeis)、云杉(Picea)和多種松樹(shù)(Pinus)〔1,2〕。該菌在前蘇聯(lián)民間用于治療胃病,甚有特效。

在歐洲和日本,可治療腹痛、感冒、肺結(jié)核盜汗、毒蛇咬傷、慢性支氣管炎等,有的作茶飲用。近年來(lái)報(bào)道,該菌具有抗癌作用〔3,4〕。

對(duì)該菌的分類位置,有過(guò)幾次報(bào)道,但對(duì)該菌的生物學(xué)特性的研究報(bào)道甚少,為了進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用該菌種和防治該菌引起的病害,對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。

1材料

1.1菌種來(lái)源采自大興安嶺落葉松立木上的苦白蹄子實(shí)體,經(jīng)鑒定為苦白蹄。

1.2菌種純化

在無(wú)菌操作條件下,切取菌體內(nèi)部黃豆粒大小菌肉組織接種于PDA培養(yǎng)基上,25e培養(yǎng)5d后,從菌落邊緣挑取菌絲再轉(zhuǎn)管,反復(fù)3次,可獲純菌

2實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響配制4種適于真菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基種類及配方見(jiàn)表1,分別接種同質(zhì)等量菌絲放于25e溫箱中培養(yǎng),每24h測(cè)量一次,并記錄(見(jiàn)表2),且根據(jù)每日記錄結(jié)果繪制菌絲生長(zhǎng)曲線圖(見(jiàn)圖1)。由以上結(jié)果可以看出,苦白蹄可以在上述四種培養(yǎng)基上生長(zhǎng),但以PDA、落PDA生長(zhǎng)較好,PDA培養(yǎng)基上日均生長(zhǎng)量為0.7mm,落PDA培養(yǎng)基上日均生長(zhǎng)量為0.9mm。在麥芽糖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)比較稀疏。

2.2不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響將菌種接于培養(yǎng)皿中PDA培養(yǎng)基上,在不同溫度條件下避光培養(yǎng),設(shè)5、10、15、20、25、30°6個(gè)梯度,每梯度3個(gè)重復(fù),每24h測(cè)量一次,并記錄(見(jiàn)表3),且根據(jù)每日記錄結(jié)果繪制生長(zhǎng)曲線圖(見(jiàn)圖2)。從以上結(jié)果可以看出,苦白蹄可以在10~30e培養(yǎng)基上生長(zhǎng),但以20e和25e生長(zhǎng)較好,菌絲致密,日均生長(zhǎng)量分別為1.6mm和1.5mm,說(shuō)明此菌為喜溫菌。

2.3光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響將接種的培養(yǎng)基分別置于有光、半光、無(wú)光的條件下,溫度均為25°,每24h測(cè)量一次,并記錄(見(jiàn)表4、圖3)。從以上結(jié)果可以看出,苦白蹄在全光、半光、無(wú)光條件下均可生長(zhǎng),但以無(wú)光條件下生長(zhǎng)最佳,無(wú)光培養(yǎng)基上日均生長(zhǎng)量為0.9mm。

2.4不同pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

2.4.1緩沖液的配制先配制0.2mol/LNa2HPO3#2H2O和0.1mol/L檸檬酸,用二者適量混合配成3、4、5、6、7、8等6個(gè)pH值梯度。

2.4.2落PDA培養(yǎng)基做好后,用HCl和NaOH溶液把pH值調(diào)至7。

2.4.3將上述緩沖液和培養(yǎng)基高壓滅菌。

2.4.4在無(wú)菌條件下倒平板后,立即用一膠頭滴管吸1ml對(duì)應(yīng)緩沖液滴入其中,輕輕搖勻,靜置冷卻。

2.4.5接種,每梯度3個(gè)重復(fù),每24h測(cè)量一次,并記錄(見(jiàn)表5)。由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,在pH3~8的條件下,菌絲均可以生長(zhǎng),但以pH3~6生長(zhǎng)較好,日均生長(zhǎng)量均為1.0mm。說(shuō)明此菌對(duì)pH值的要求不嚴(yán)格,在各種pH值下差別不大。

2.5不同C源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

在下面的各項(xiàng)試驗(yàn)中,均用Lilly和Barnett半組合培養(yǎng)基〔5,6〕。培養(yǎng)基配方見(jiàn)表6。將表6中列出的C源和維生素在距離紫外燈下8cm處鋪成薄層,用紫外燈照射60min滅菌,維生素滅菌后配成原液使用。磷酸鹽用200ml蒸餾水溶解后高壓滅菌。其它物質(zhì)溶入800ml蒸餾水中高壓滅菌,最后這些成分在無(wú)菌的條件下混合。培養(yǎng)基滅菌后,用1mol/L的鹽酸和1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值至6。在半組合培養(yǎng)基中,固定N源(天冬素),分別以不同C源進(jìn)行培養(yǎng),每種處理3個(gè)重復(fù),每隔24h測(cè)量一次菌絲生長(zhǎng)半徑,并記錄(見(jiàn)表7)。由上述結(jié)果表明,該菌對(duì)C源的要求并不十分嚴(yán)格,除乳糖、麥芽糖以外,生長(zhǎng)均較好,但以萄萄糖、果糖最佳。

2.6不同N源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

固定C源(萄萄糖),分別用不同的N源進(jìn)行培養(yǎng),基本方法同上,每24h測(cè)量一次,并記錄。結(jié)果見(jiàn)表8。由上述結(jié)果表明,該菌對(duì)N源的要求不嚴(yán)格,其中以甘氨酸生長(zhǎng)較佳,可作為其生長(zhǎng)的最佳N源。

2.7微量元素對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

在C、N源(葡萄糖和酒石酸胺)固定下,分別缺少鉀、鎂、鐵、鋅、錳離子,然后與正常生長(zhǎng)的對(duì)照菌落進(jìn)行比較(見(jiàn)表9)。從表9中看出,缺K+及Mg2+生長(zhǎng)較差,說(shuō)明該菌對(duì)K+、Mg2+等的要求比較嚴(yán)格。

2.8維生素VB1對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

由上述結(jié)果表明,維生素VB1對(duì)該菌生長(zhǎng)影響不大,有維生素VB1生長(zhǎng)較好。

3結(jié)論

3.1苦白蹄在落PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最佳。

3.2苦白蹄在10~30e都能生長(zhǎng),在此溫度區(qū)間中生長(zhǎng)量與溫度成正比,最適溫度為20e。

3.3光照對(duì)苦白蹄生長(zhǎng)影響極大,生長(zhǎng)量與光量成反比,無(wú)光時(shí)生長(zhǎng)最快。

3.4此菌在pH3~8均能生長(zhǎng),最適生長(zhǎng)pH值為3~4。

3.5在庶糖、麥芽糖、葡萄糖、乳糖、果糖、無(wú)糖的基質(zhì)上培養(yǎng),除乳糖、麥芽糖生長(zhǎng)較差外,其余生長(zhǎng)較好,最佳C源是葡萄糖。

3.6在所實(shí)驗(yàn)的N源上均生長(zhǎng)較好,最佳N源為甘氨酸。

3.7此菌在缺少錳、鋅、鐵離子的情況下與對(duì)照相差無(wú)幾,但缺鉀、鎂離子的菌絲生長(zhǎng)略受阻。

3.8在有VB1的條件下生長(zhǎng)較好。