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《湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)雜志》2014年第十一期

1結(jié)果與分析

1．1預(yù)處理和制片條件采用4種低濃度預(yù)處理液：0．02％秋水仙素、0．05％秋水仙素、0．002mol／L的8－羥基喹啉水溶液、0．02％秋水仙素與0．002mol／L8－羥基喹啉的混合液，預(yù)處理1、2、3、4h。結(jié)果表明，4種預(yù)處理液中以0．05％秋水仙素、0．02％秋水仙素與0．002mol／L8－羥基喹啉的混合液作用效果較好，預(yù)處理時(shí)間1、2h時(shí)分裂相多處于前期和前中期，3h時(shí)中期分裂相較多且縊縮程度恰到好處，4h時(shí)染色體縊縮為難以計(jì)數(shù)的小點(diǎn)狀。此外，預(yù)處理時(shí)應(yīng)保持穩(wěn)定的低溫環(huán)境，溫度穩(wěn)定在18～20℃時(shí)，中期分裂相較多，而在不穩(wěn)定的條件下分裂相較少。因試驗(yàn)材料為木本植物，所需解離時(shí)間較長(zhǎng)，解離20min以下時(shí)胞質(zhì)和染色體均染色較深；解離30min以上時(shí)均著色很淺；解離25min時(shí)，解離較充分，染色效果最好，胞質(zhì)不著色或呈淡紅色，而染色體著色較深。本試驗(yàn)最終確定野牡丹屬植物預(yù)處理和制片條件為環(huán)境溫度穩(wěn)定在18～20℃，使用0．02％秋水仙素與0．002mol／L8－羥基喹啉的混合液預(yù)處理3h，解離25min。

1．2染色體數(shù)目從每個(gè)種的7～8個(gè)樣品的根尖中選取4～5張質(zhì)量較好的壓片，選擇染色體染色清晰、分散較好的30個(gè)細(xì)胞進(jìn)行觀察、記數(shù)。發(fā)現(xiàn)5個(gè)種的細(xì)胞染色體數(shù)雖然均有一定的變化范圍，但基本都集中在一個(gè)數(shù)量上，因此將出現(xiàn)頻率最高的這個(gè)數(shù)量作為該種的染色體數(shù)目。如表1所示，野牡丹2n＝24占70．0％，細(xì)葉野牡丹2n＝24占60．0％，多花野牡丹2n＝24占66．7％，地菍2n＝24占63．3％，展毛野牡丹2n＝24占86．7％。由此可認(rèn)為，野牡丹、細(xì)葉野牡丹、多花野牡丹、地菍、展毛野牡丹染色體數(shù)目均為2n＝24。每個(gè)種中還有其他較小比例的染色體數(shù)目，這可能與野牡丹屬的無(wú)性繁殖存在染色體數(shù)目的變異或染色體過(guò)小有關(guān)。

1．3染色體大小野牡丹、細(xì)葉野牡丹、多花野牡丹、地菍、展毛野牡丹染色體組總長(zhǎng)度分別為27．86、23．44、17．09、39．86、46．84μm；絕對(duì)長(zhǎng)度范圍依次為0．82～1．67μm、0．71～1．45μm、0．43～1．26μm、1．01～2．36μm、1．49～2．99μm；相對(duì)長(zhǎng)度為2．93～5．67、3．09～5．87、2．64～7．14、2．62～5．92、3．18～6．12，最長(zhǎng)染色體與最短染色體的比值為2．0、2．0、2．9、2．3、2．0。

2結(jié)論與討論

本研究中，野牡丹屬的5個(gè)種染色體數(shù)均為2n＝24，這與Almeda［7］所研究的野牡丹科其他屬的染色體可能為n＝9到n＝12基本一致。根據(jù)染色體分類的標(biāo)準(zhǔn)［8］，野牡丹、細(xì)葉野牡丹、多花野牡丹、地菍、展毛野牡丹均為小染色體類型，不易分辨著絲點(diǎn)，無(wú)法作核型分析。目前，對(duì)小染色體尚無(wú)明確的分析標(biāo)準(zhǔn)，Almeda［7］在對(duì)野牡丹科其他屬植物的研究中，只分析了小染色體減數(shù)分裂的行為，但未作具體分析。最長(zhǎng)染色體與最短染色體的比值可作為核型對(duì)稱與否的分類標(biāo)準(zhǔn)之一［9］，本研究中野牡丹屬5個(gè)種的比值為2．0～2．9，說(shuō)明野牡丹屬的核型比較對(duì)稱。根據(jù)李懋學(xué)［8］的染色體相對(duì)大小差別愈大，核型越不對(duì)稱的觀點(diǎn)，比較5個(gè)種的染色體相對(duì)長(zhǎng)度的標(biāo)準(zhǔn)差，野牡丹為0．86、細(xì)葉野牡丹為0．92、多花野牡丹為1．21、地菍為0．84、展毛野牡丹為0．87，說(shuō)明5個(gè)種中地菍的核型較對(duì)稱，而多花野牡丹的核型對(duì)稱性較差。由于整個(gè)植物界的核型進(jìn)化趨勢(shì)是由對(duì)稱向不對(duì)稱發(fā)展，所以可認(rèn)為5個(gè)種從原始到進(jìn)化的順序可能為：地菍、野牡丹、展毛野牡丹、細(xì)葉野牡丹、多花野牡丹。

植物核型信息在屬以下等級(jí)的分類研究中起重要的作用。但是，核型分析對(duì)于那些染色體基數(shù)和核型一致的屬以下分類幫助不大［10］。野牡丹屬可能就屬于這一類。從最長(zhǎng)染色體與最短染色體的比值及染色體相對(duì)長(zhǎng)度的標(biāo)準(zhǔn)差兩方面分析，該屬5個(gè)種間核型對(duì)稱性差異很小，具很大的相似性，說(shuō)明野牡丹屬植物染色體進(jìn)化速率較慢，是比較原始的類群。這與根據(jù)形態(tài)學(xué)上雄蕊多數(shù)、子房多室、胚珠多數(shù)等原始類型特征，以及各特征中數(shù)量減化、雄蕊藥隔特化、子房下位等推斷的野牡丹科為從原始向次原始或稍進(jìn)化類型過(guò)渡的一個(gè)科相符［11］。觀察中發(fā)現(xiàn)野牡丹屬染色體極易重疊或不在一個(gè)平面上，且染色體極小，很難準(zhǔn)確地統(tǒng)計(jì)染色體數(shù)目，這就需要在今后的研究中查明引起染色體重疊和不處于同一平面的原因，探索適宜野牡丹屬植物染色體特點(diǎn)的研究方法。

作者：張媛李燕楊利平單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院