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《昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)》2015年第十一期

摘要:

【目的】通過(guò)對(duì)中華蜜蜂Apisceranacerana嗅覺(jué)受體AcerOrco的表達(dá)及蛋白定位分析，闡明AcerOrco的表達(dá)特性，以期為進(jìn)一步探索其功能提供理論依據(jù)。【方法】分別通過(guò)qRT-PCR技術(shù)和Westernblot技術(shù)對(duì)中華蜜蜂氣味受體AcerOrcomRNA及蛋白在內(nèi)勤蜂和采集蜂5個(gè)組織部位(觸角、頭、胸、腹和足)中的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析，采用免疫組化技術(shù)對(duì)AcerOrco蛋白的表達(dá)進(jìn)行定位分析。【結(jié)果】定量結(jié)果顯示，AcerOrco轉(zhuǎn)錄本在內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織中均有表達(dá)，其中觸角中的表達(dá)量最高;該基因在采集蜂各組織中的表達(dá)量普遍高于內(nèi)勤蜂。AcerOrco受體蛋白在內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織中也均有表達(dá)，在觸角和頭部的表達(dá)量明顯高于其他組織。定位結(jié)果顯示，在內(nèi)勤蜂觸角中，AcerOrco主要在毛形感器中表達(dá)，板形感器中表達(dá)不明顯;在采集蜂觸角的板形感器和毛形感器中均有表達(dá)，但毛形感器中的表達(dá)更多一些。【結(jié)論】獲得了AcerOrcomRNA及其蛋白在內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織中的表達(dá)特性，并將這一蛋白表達(dá)定位于工蜂觸角的毛形感器和板形感器中。

關(guān)鍵詞:

中華蜜蜂;嗅覺(jué)受體;mRNA表達(dá);蛋白表達(dá);蛋白定位

昆蟲(chóng)依賴(lài)靈敏的嗅覺(jué)系統(tǒng)對(duì)外界環(huán)境中的氣味分子進(jìn)行識(shí)別，產(chǎn)生有利于其生存和繁殖的各種行為習(xí)性，以適應(yīng)多變的環(huán)境。昆蟲(chóng)的嗅覺(jué)識(shí)別過(guò)程有多種蛋白參與其中，主要包括氣味結(jié)合蛋白(odorantbindingproteins，OBPs)、化學(xué)感受蛋白(chemosensoryproteins，CSPs)和嗅覺(jué)受體(olfactoryreceptors，Ors)等(Pelosietal．，2006)。其中，Ors在這一過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。當(dāng)外界環(huán)境中的氣味分子經(jīng)昆蟲(chóng)嗅覺(jué)感覺(jué)毛表皮上的微孔進(jìn)入到感器淋巴液中，與OBPs結(jié)合形成復(fù)合體。復(fù)合體穿過(guò)感器淋巴液，與神經(jīng)元樹(shù)突膜上的Ors相結(jié)合，啟動(dòng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，從而將化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)傳入大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)(RützlerandZwiebel，2005)。昆蟲(chóng)嗅覺(jué)受體具有7次跨膜結(jié)構(gòu)，與脊椎動(dòng)物G蛋白偶聯(lián)受體類(lèi)似。但昆蟲(chóng)嗅覺(jué)受體的N端位于細(xì)胞膜內(nèi)而C端在細(xì)胞膜外(Bentonetal．，2006;Lundinetal．，2007)，這與G蛋白偶聯(lián)受體相反。因此昆蟲(chóng)的嗅覺(jué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程并不是傳統(tǒng)的G蛋白模式，而是一種獨(dú)特的離子門(mén)控傳遞方式(Satoetal．，2008;Wicheretal．，2008)。昆蟲(chóng)的嗅覺(jué)受體分為兩類(lèi)，一類(lèi)是傳統(tǒng)的嗅覺(jué)受體，此類(lèi)嗅覺(jué)受體在不同昆蟲(chóng)間的同源性比較低，可以識(shí)別氣味分子和信息素;另一類(lèi)受體在不同昆蟲(chóng)間高度保守，此類(lèi)受體并無(wú)感受氣味的功能，但在大多數(shù)嗅覺(jué)神經(jīng)元中與傳統(tǒng)嗅覺(jué)受體共表達(dá)，被稱(chēng)作嗅覺(jué)共受體(olfactoryreceptorco-receptor，Orco)。Orco雖無(wú)識(shí)別氣味分子的功能，但在昆蟲(chóng)的嗅覺(jué)識(shí)別過(guò)程中仍發(fā)揮著重要的作用。研究表明，Orco可以提高氣味分子與受體的結(jié)合效率(Wetzeletal．，2001;Sakuraietal．，2004;Neuhausetal．，2005;Nakagawaetal．，2005)，還可使傳統(tǒng)嗅覺(jué)受體在神經(jīng)元樹(shù)突上準(zhǔn)確定位(Neuhausetal．，2005)。作為一種典型的社會(huì)性昆蟲(chóng)，蜜蜂有序維持整個(gè)蜂群的生活、繁殖以及外出采集等活動(dòng)都是通過(guò)嗅覺(jué)識(shí)別氣味來(lái)傳遞的。蜜蜂還是一種重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)，對(duì)蜜蜂嗅覺(jué)的研究可以為制定合理的蜜蜂飼養(yǎng)管理方法，以及更有效地利用蜜蜂為作物傳粉提供一定的理論基礎(chǔ)。Robertson和Wanner(2006)在西方蜜蜂Apismellifera全基因組測(cè)序完成的基礎(chǔ)上，利用生物信息學(xué)方法，從中鑒定出170個(gè)Or基因，其中包含7個(gè)假基因。蜜蜂龐大的嗅覺(jué)基因家族，使它擁有超越其他昆蟲(chóng)更靈敏的嗅覺(jué)。中華蜜蜂Apisceranacerana是我國(guó)的本土蜂種，較西方蜜蜂嗅覺(jué)更靈敏，善于利用零星蜜粉源(楊冠煌，2001)。因此中蜂是探究昆蟲(chóng)嗅覺(jué)機(jī)制良好的實(shí)驗(yàn)材料。

張林雅等(2012)利用RT-PCR技術(shù)對(duì)中華蜜蜂AcerOrco基因進(jìn)行了克隆，使用Real-timePCR技術(shù)鑒定其在中華蜜蜂不同發(fā)育時(shí)期及不同組織的表達(dá)譜;利用免疫熒光定位技術(shù)對(duì)該氣味受體在中華蜜蜂工蜂觸角中進(jìn)行亞細(xì)胞定位，推測(cè)AcerOrco與中蜂嗅覺(jué)發(fā)育和觸角感器功能密切相關(guān)。本課題組前期采用RACE技術(shù)獲得了AcerOrco的cDNA全長(zhǎng)序列，采用熒光定量PCR及原位雜交技術(shù)，對(duì)AcerOrco轉(zhuǎn)錄本在工蜂及雄蜂不同發(fā)育階段的表達(dá)特點(diǎn)進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示AcerOrco在雄蜂和工蜂不同發(fā)育階段均有表達(dá)，工蜂中的表達(dá)量均在羽化出房前后達(dá)到最高，而雄蜂中的表達(dá)量在整個(gè)發(fā)育階段是逐漸增高的。利用原位雜交技術(shù)對(duì)AcerOrco在工蜂及雄蜂觸角上的表達(dá)進(jìn)行定位分析，結(jié)果顯示AcerOr2的陽(yáng)性雜交信號(hào)出現(xiàn)在觸角的毛形感器和板形感器神經(jīng)元細(xì)胞中(Zhaoetal．，2013;趙慧婷等，2015)。本研究是在課題組前期已獲得Orco基因cDNA全序列并對(duì)其mRNA的時(shí)空表達(dá)特性進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，利用qRT-PCR和Westernblot技術(shù)對(duì)Orco基因在中蜂內(nèi)勤蜂和采集蜂不同組織的表達(dá)情況進(jìn)行了定量分析，利用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)Orco基因在中蜂觸角的表達(dá)進(jìn)行了定位，旨在對(duì)Orco受體的蛋白表達(dá)進(jìn)行研究，并對(duì)該受體RNA水平和蛋白水平的表達(dá)情況進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，驗(yàn)證其表達(dá)是否一致，以期為進(jìn)一步研究該基因的功能提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1．1試蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)用中華蜜蜂樣本均取自山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院中蜂實(shí)驗(yàn)場(chǎng)。在蜂群中加入一張新巢脾，蜂王產(chǎn)卵后記錄日期，在工蜂即將羽化出房的前一天，將該封蓋子脾脫蜂后帶回實(shí)驗(yàn)室，放入34℃恒溫培養(yǎng)箱中。次日新蜂出房后，用無(wú)毒、無(wú)味的油漆在胸背部標(biāo)記約200頭，迅即放回原蜂群中，之后于第3－15日期間隨機(jī)從巢內(nèi)捉取被標(biāo)記的工蜂共80頭，作為內(nèi)勤蜂樣本。隨機(jī)從蜂箱前捉取足部攜帶花粉團(tuán)的工蜂80頭作為采集蜂樣本。每次采樣，將采得的蜜蜂在活體狀態(tài)下用眼科鑷分別取其觸角、頭、胸、腹和足，迅速投入液氮中研磨至粉狀，置于－80℃冰箱保存，該樣本用于Real-timePCR和Westernblot。冰凍切片及免疫組織化學(xué)定位檢測(cè)用樣本為實(shí)驗(yàn)當(dāng)日于巢門(mén)前隨機(jī)捉取采粉歸巢的工蜂。

1．2主要試劑總RNA提取試劑Trizol、RT-PCR試劑盒PrimeScriptTMRTReagentKit、熒光定量試劑盒SYBRPrimeScriptTMRT-PCRKit等購(gòu)自TaKaRa公司;蛋白抽提液、BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒、蛋白上樣緩沖液、超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物、即用型SABC免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒以及4%多聚甲醛固定液購(gòu)自博士德生物有限公司;熒光定量用引物由華大科技服務(wù)有限公司合成;包埋劑為日本Sakura公司產(chǎn)品。

1．3總RNA的提取及cDNA合成根據(jù)Trizol試劑說(shuō)明書(shū)，提取內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織樣本的總RNA。采用微量核酸蛋白檢測(cè)儀檢測(cè)其濃度符合要求(OD值在1．8～2．1之間)后，按RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，作為PCR以及熒光定量PCR分析的模板。

1．4熒光定量PCR根據(jù)本課題組前期實(shí)驗(yàn)得到的中華蜜蜂OrcocDNA全序列設(shè)計(jì)特異性引物(表1)，對(duì)該基因在中蜂內(nèi)勤蜂和采集蜂不同組織中的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行熒光定量分析。Real-timePCR反應(yīng)總體系為20μL，其中cDNA模版2μL，SYBRPremixExTaqTMⅡ(2×)10μL，上、下游引物(10μmol/L)各0．8μL，ROXReferenceDyeⅡ(50×)0．4μL，ddH2O6μL。熒光定量的反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性30s;循環(huán)條件95℃5s，6330s，共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣本進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。以各樣品所對(duì)應(yīng)的Rps18的Ct值為陽(yáng)性對(duì)照，從而得到AcerOrco基因在內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織的表達(dá)譜。

1．5多克隆抗體的制備以中華蜜蜂OrcocDNA全序列設(shè)計(jì)并合成多肽抗原，免疫2只健康的新西蘭大白兔，之后采用G蛋白純化和免疫親和純化2種方法進(jìn)行抗體純化。該部分實(shí)驗(yàn)委托京天成生物技術(shù)(北京)有限公司完成。

1．6總蛋白的提取及Westernblot蛋白檢測(cè)按照抽提液試劑盒說(shuō)明書(shū)，提取內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織樣品的總蛋白。用BCA蛋白質(zhì)定量試劑檢測(cè)總蛋白濃度，10%SDS溶液調(diào)整各樣品總蛋白濃度一致。將濃度調(diào)整后的各組織總蛋白相同體積加樣到10%SDS-PAGE中進(jìn)行電泳檢測(cè)。分離后的蛋白轉(zhuǎn)印70min到NC膜，脫脂奶粉封閉2h，TBST洗膜3次后，加入多克隆抗體，室溫?fù)u床孵育1h后，4℃孵育過(guò)夜。TBST洗膜3次后，加入羊抗兔IgG-HRP二抗，室溫孵育1．5h。充分洗膜后，用超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行結(jié)果檢測(cè)。

1．7冰凍切片及免疫組織化學(xué)定位檢測(cè)采集回巢時(shí)后足攜帶花粉的工蜂，活體將觸角取下，在冰凍切片機(jī)中進(jìn)行切片，厚度約5μm。粘片后用4%的多聚甲醛溶液固定30min，蒸餾水洗3次，每次10min。之后，于30%H2O2與純甲醇以1∶50(v/v)的混合液中，室溫浸泡30min，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，蒸餾水洗2次。在載玻片上粘有組織的位置滴加5%BSA封閉液，室溫放置40～60min，棄去多余的液體，滴加稀釋好的一抗，4℃孵育過(guò)夜，同時(shí)用PBS溶液代替一抗作為陰性對(duì)照。PBS洗3次，滴加生物素化山羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS再洗3次，滴加SABC，37℃孵育20min，PBS洗4次，每次10min。使用DAB顯色劑進(jìn)行顯色，蒸餾水洗滌后用中性樹(shù)脂(二甲苯稀釋)進(jìn)行封片。光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果，用Image-ProPlus7．0軟件分析并拍照。1．8數(shù)據(jù)分析熒光定量結(jié)果應(yīng)用MXPro-MX3000P軟件(Stratagene，美國(guó))進(jìn)行分析處理。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及熒光曲線的Ct值，采用2－△△Ct法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析(Livaketal．，2001)。采用SPSS17．0軟件中的ANOVA法進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行顯著性差異分析。所得結(jié)果均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示，并利用OriginPro8．0軟件進(jìn)行圖形分析。

2結(jié)果

2．1多克隆抗體檢測(cè)結(jié)果AcerOrco多克隆抗體由京天成生物技術(shù)(北京)有限公司合成后，在實(shí)驗(yàn)室對(duì)抗體進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，選取的實(shí)驗(yàn)材料為中蜂胸部組織。結(jié)果如圖1所示。從圖1中可以看出，陽(yáng)性結(jié)果在目的蛋白分子量處條帶清晰，無(wú)雜帶，陰性結(jié)果的相應(yīng)位置無(wú)明顯條帶，說(shuō)明所制備的抗體確為目的蛋白抗體，且特異性較好。

2．2AcerOrcomRNA在中蜂內(nèi)勤蜂和采集蜂不同組織的表達(dá)譜分析如圖2所示，AcerOrco的轉(zhuǎn)錄本在內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織中均有表達(dá)，在采集蜂各組織中的表達(dá)量普遍高于內(nèi)勤蜂的表達(dá)量(足部除外)(差異顯著性用雙星號(hào)表示)，且兩者在觸角中的表達(dá)量均高于其他組織1000倍以上，差異極顯著(差異顯著性用大寫(xiě)英文字母表示)。除觸角外，在內(nèi)勤蜂各組織中，足部的表達(dá)量相對(duì)較高，其次為頭部和腹部，胸部的表達(dá)量最少;而在采集蜂各組織中，頭部和胸部的表達(dá)量相對(duì)較高，且兩組織中的表達(dá)量幾乎無(wú)差異，其次為腹部，而足中的表達(dá)最少。

2．3AcerOrco受體蛋白在中蜂各組織的表達(dá)分析AcerOrco在內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織中蛋白表達(dá)的Westernblot結(jié)果如圖3所示，AcerOrco在內(nèi)勤蜂和采集蜂的觸角、頭、胸、腹和足各組織中均有表達(dá)。其中，在內(nèi)勤蜂頭部中表達(dá)量最高，觸角中次之，其他3個(gè)組織中表達(dá)量差異不大;采集蜂觸角中表達(dá)量比頭部高，胸、腹和足中的表達(dá)量較少。

2．4AcerOrco在中蜂觸角中的表達(dá)定位本實(shí)驗(yàn)用前期制備的多克隆抗體，與中蜂觸角切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)反應(yīng)，采用藍(lán)色DAB染色，陽(yáng)性結(jié)果為藍(lán)色點(diǎn)狀或圓盤(pán)狀，背景為淡藍(lán)色。對(duì)照組背景為無(wú)色或淡藍(lán)色，無(wú)明顯表達(dá)結(jié)果，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果特異性較好。免疫組化結(jié)果顯示，AcerOrco在中蜂觸角鞭節(jié)中均有表達(dá)，且表達(dá)位置為感器神經(jīng)元細(xì)胞層。AcerOrco在采集蜂觸角中的表達(dá)結(jié)果既有點(diǎn)狀(圖4中黑色箭頭所指)，又有圓盤(pán)狀(圖4中紅色箭頭所指)，點(diǎn)狀表達(dá)結(jié)果相對(duì)較多一些，推測(cè)AcerOrco在采集蜂觸角的板形感器和毛形感器中均有表達(dá)，但毛形感器中的表達(dá)更多一些;在內(nèi)勤蜂的觸角中，主要為點(diǎn)狀表達(dá)結(jié)果，圓盤(pán)狀結(jié)果較不明顯，推測(cè)AcerOrco主要在內(nèi)勤蜂觸角上的毛形感器中表達(dá)。從圖4中還可以看出，采集蜂觸角中的點(diǎn)狀表達(dá)結(jié)果明顯多于內(nèi)勤蜂，意味著采集蜂AcerOrco表達(dá)量高于內(nèi)勤蜂。

3討論

蜜蜂是一種營(yíng)高度社會(huì)性生活的昆蟲(chóng)，在一個(gè)蜂群里，工蜂承擔(dān)了除產(chǎn)卵之外的蜂巢內(nèi)外的一切工作，內(nèi)勤蜂是蜂群中的幼、青年工蜂個(gè)體，主要從事保溫、扇風(fēng)、飼喂幼蟲(chóng)和蜂王、清理巢房、夯實(shí)花粉、釀蜜以及筑巢等工作;采集蜂是蜂群中的壯年蜂，主要承擔(dān)著外出采集花蜜、花粉、水和樹(shù)脂等工作(Beshersetal．，2001)，因此采集蜂接觸到的氣味分子的種類(lèi)和數(shù)量更多。觸角是昆蟲(chóng)的主要嗅覺(jué)器官，上面分布有大量的嗅覺(jué)感器，而氣味受體基因主要在嗅覺(jué)感器的神經(jīng)元細(xì)胞中表達(dá)(Vosshalletal．，2000)。蜜蜂觸角上分布有多種由皮細(xì)胞特化而來(lái)的化學(xué)感受器，其中，板形感器和毛形感器是最常見(jiàn)的2種感受器，這2種感受器皆與蜜蜂的嗅覺(jué)感受相關(guān)(Neuhausetal．，2005;Nakagawaetal．，2005)。本研究結(jié)果顯示，AcerOrco在內(nèi)勤蜂和采集蜂觸角中的表達(dá)量均高于其他組織。AcerOrco在采集蜂中的表達(dá)量普遍高于內(nèi)勤蜂(足除外)，這與內(nèi)勤蜂和采集蜂在群內(nèi)所承擔(dān)的工作有關(guān)，也與張林雅等(2012)的研究結(jié)果相一致。AcerOrco在中蜂內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織中均有表達(dá)，且兩者在觸角中的表達(dá)量均極顯著地高于其他組織，如內(nèi)勤蜂觸角中的表達(dá)量是頭部的1600倍，胸部的3500倍，這使得頭部、胸部和腹部的表達(dá)量幾乎可以忽略不計(jì)，這與張林雅等(2012)報(bào)道的Orco在內(nèi)勤蜂各組織中只在觸角和足中表達(dá)，而在采集蜂各組織中均有表達(dá)的結(jié)論相似。在其他昆蟲(chóng)中對(duì)Orco表達(dá)特性的研究也有較多報(bào)道，如棉鈴蟲(chóng)Heliothisarmigera、桃蛀螟Dichocrocispunctiferalis、斜紋夜蛾Spodopteralitura、中紅側(cè)溝繭蜂Microplitismediator、家蠶Bombyxmori等(Kriegeretal．，2005;王桂榮等，2005;張帥等，2009a，2009b;楊承遠(yuǎn)，2010;陳茜等，2011;葛星等，2013)，其Orco基因或在觸角中特異性表達(dá)，或在觸角中表達(dá)量最高，與本研究結(jié)果基本相符，體現(xiàn)了Orco在不同昆蟲(chóng)間功能的保守性。

目前對(duì)昆蟲(chóng)嗅覺(jué)受體蛋白表達(dá)特性的研究報(bào)道較少。本研究采用Westernblot技術(shù)對(duì)AcerOrco蛋白在內(nèi)勤蜂和采集蜂各組織的表達(dá)特性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，AcerOrco在采集蜂觸角中表達(dá)最多，內(nèi)勤蜂中頭部表達(dá)量稍多于觸角，這有可能是與實(shí)驗(yàn)中我們對(duì)觸角蛋白溶液進(jìn)行了濃縮，在此過(guò)程中產(chǎn)生了蛋白損耗有關(guān)。因此，總體上本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與前期熒光定量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致，這也從蛋白水平驗(yàn)證了Orco的表達(dá)特性。迄今對(duì)蜜蜂嗅覺(jué)受體基因的表達(dá)定位研究，大多采用原位雜交的方法，例如Krieger等(2003)采用原位雜交的方法對(duì)西方蜜蜂AmelOr2mRNA的表達(dá)定位進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)AmelOr2基因mRNA主要在位于工蜂觸角邊緣的板形感器和毛形感器的細(xì)胞中表達(dá)。張林雅等(2012)利用免疫熒光技術(shù)對(duì)中華蜜蜂Orco受體進(jìn)行亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)該受體同樣在毛形感器和板形感器中表達(dá)。而本課題組前期亦采用原位雜交技術(shù)對(duì)AcerOr2在中華蜜蜂觸角上的表達(dá)進(jìn)行了定位分析(Zhaoetal．，2013;趙慧婷等，2015)，AcerOr2的陽(yáng)性雜交信號(hào)出現(xiàn)在中蜂觸角底膜邊緣的一連串細(xì)胞中，而這些細(xì)胞恰恰處在毛形感器和板形感器中。本研究進(jìn)一步采用免疫組化方法研究了AcerOr2蛋白表達(dá)特性，發(fā)現(xiàn)與原位雜交結(jié)果相似，AcerOrco在中蜂觸角鞭節(jié)的毛形感器和板形感器中均有表達(dá)。其他昆蟲(chóng)的共受體基因，如DOr83b，AgOr7和MsexOr2等的表達(dá)情況也相類(lèi)似(Foxetal．，2001;Kriegeretal．，2003;Malpeletal．，2008;Patchetal．，2009;Miuraetal．，2010)。同時(shí)，本研究結(jié)果還顯示，AcerOrco在采集蜂觸角中的表達(dá)明顯多于內(nèi)勤蜂，這與mRNA的表達(dá)結(jié)果相一致。目前多數(shù)有關(guān)Orco的功能研究均表明，Orco并不直接感受氣味分子，需與傳統(tǒng)氣味受體Ors結(jié)合形成二聚體才能發(fā)揮嗅覺(jué)識(shí)別作用(Sakuraietal．，2004)，故今后可結(jié)合具體的Ors共同進(jìn)行功能研究，以進(jìn)一步探索中蜂優(yōu)越的蜜粉源搜尋能力，為揭示中蜂的嗅覺(jué)識(shí)別機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。

作者：張中印 楊珊珊 孟嬌 趙慧婷 姜玉鎖 單位：河南科技學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院