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1材料

1.1受試藥物

鼻炎滴劑(佛山德眾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)08108，因本藥既有中藥提取液又另添加中藥有效成分，劑量無法用含生藥量表示，故本文中用樣品藥液的毫升數(shù)來表示);地塞米松磷酸鹽注射液，廣東三才醫(yī)藥集團(tuán)有限公司,批號(hào)20080855。阿司匹林腸溶片(以下簡稱“阿司匹林”)，濟(jì)南永寧制藥股份有限公司，批號(hào)080108。鹽酸麻黃堿注射液(以下簡稱“麻黃堿”)，東北制藥集團(tuán)公司沈陽第一制藥廠。注射用氨芐西林鈉，山東瑞陽制藥公司，批號(hào)：08032702;磷酸組織胺，上海生化試劑廠產(chǎn)品。角叉菜膠，遼寧省藥物研究所提供。伊文思藍(lán)，為Flucka產(chǎn)品;二甲苯(分析純)，中國人民解放軍第90662廠生產(chǎn)。傷寒、副傷寒甲、乙菌苗，衛(wèi)生部武漢生物制品研究所產(chǎn)品。

1.2菌種

肺炎克雷伯桿菌[CMCC(B)46108]、乙型溶血性鏈球菌[CMCC(B)32204]、甲型溶血性鏈球菌[CMCC(B)32213]、變形桿菌[CMCC(B)49105]、金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26001]、大腸桿菌[CMCC(B)44101]，以上均購自中國藥品生物制品菌檢定所;肺炎鏈球菌，廣東藥學(xué)院微生物學(xué)教研室提供。

1.3動(dòng)物

NIH小鼠，體質(zhì)量19～21g，雌雄各半，合格證號(hào)2008A001;SD大鼠，體質(zhì)量150～170g，雌雄各半，合格證號(hào)2008A020;新西蘭兔，體質(zhì)量2.0～2.2kg，雌雄兼用，合格證號(hào)2008A004，均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2方法與結(jié)果

2.1抗炎實(shí)驗(yàn)

2.1.1鼻炎滴劑對(duì)大鼠組胺性鼻炎鼻黏膜毛細(xì)血管通透性的影響[1，2]SD大鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組：高劑量組用原液，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為0.04mL/只)、地塞米松組。各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日滴鼻給藥1次，給藥體積均為0.04mL/只，連續(xù)3d，末次給藥1h后，分別給大鼠尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.4mL/100g，隨即滴鼻給予1%(ρ)磷酸組織胺0.02mL/只(0.2mg)，20min后處死大鼠，將鼻腔分離剪下，剪碎置10mL具塞離心管中，加7∶3(V∶V)丙酮與生理鹽水混合液4mL浸泡，45℃孵育72h，期間振搖數(shù)次，3000r/min離心15min，取上清液于610nm比色測定其吸光度。由結(jié)果可看出，鼻炎滴劑的3個(gè)劑量組吸光度均小于空白對(duì)照組，表明鼻炎滴劑能非常顯著降低大鼠組胺性鼻炎鼻黏膜毛細(xì)血管通透性，見表1。表1鼻炎滴劑對(duì)大鼠組胺性鼻炎鼻黏膜毛細(xì)血管通透性的影響與空白對(duì)照組比較:**P<0.01(t檢驗(yàn))

2.1.2鼻炎滴劑對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響[3]NIH小鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組：高劑量組用原液，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為0.05mL/只)、地塞米松組(0.05mL/只，即0.25mg)。各實(shí)驗(yàn)組小鼠每日耳廓涂藥1次，對(duì)照組涂以等量的生理鹽水，連續(xù)3次，末次涂藥后1h，各組小鼠用蒸餾水洗去藥液，用干棉球擦凈。各組小鼠右耳涂二甲苯0.05mL/只，左耳作對(duì)照，15min后處死小鼠，用直徑7mm的打孔器將雙耳相同部位等面積切下，用FA2104S電子分析天平(上海天平儀器廠)分別稱重，按下式計(jì)算右耳腫脹率：右耳腫脹率(%)=[(右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量)/左耳片質(zhì)量]×100%。結(jié)果表明鼻炎滴劑對(duì)二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹均有非常顯著的抑制作用，且呈劑量依賴性，見表2。

2.1.3鼻炎滴劑對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響[1]SD大鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組：高劑量組用原液，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為4mL/kg，分別為小鼠半數(shù)致死量的1/5、1/10、1/20)、地塞米松組(皮下注射給藥給藥)。因局部給藥，難以觀察本項(xiàng)目的指標(biāo)，故灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用乙醚吸入麻醉，在每只鼠的左右腋窩部用碘酒消毒，75%(φ)酒精棉球脫碘后，各切開1cm長小口，用眼科鑷將30mg的高壓滅菌棉球(各加入氨芐青霉素10mg?mL-1?個(gè)-1，50℃烘干)從切口處植入皮下，隨后縫合皮膚。從手術(shù)當(dāng)日開始給藥，每日1次，連續(xù)7d，第8天打開原切口，將棉球取出，剔除脂肪組織，70℃烘干，稱重。將稱得的質(zhì)量減去棉球原質(zhì)量，即為肉芽腫質(zhì)量。結(jié)果顯示，鼻炎滴劑組的棉球肉芽腫干重明顯小于空白對(duì)照組，說明其對(duì)大鼠棉球肉芽腫有顯著的抑制作用，見表3。表2鼻炎滴劑對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響表3鼻炎滴劑對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響

2.1.4鼻炎滴劑對(duì)大鼠足腫脹的影響[1，4]SD大鼠50只，隨機(jī)均分5組，即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組分別為4mL、2mL、1mL樣品液/kg，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為4mL/kg，分別為小鼠半數(shù)致死量的1/5、1/10、1/20)、地塞米松組(皮下注射給藥)。因局部給藥，難以觀察本項(xiàng)目的指標(biāo)，故灌胃給藥。連續(xù)3d，用軟皮尺先測定每鼠右后肢正常踝關(guān)節(jié)周長，末次給藥1h后，分別在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠混懸液0.05mL/只，致炎。隨后分別于1、2、4、6h各測1次右后肢踝關(guān)節(jié)周長，記錄結(jié)果，按下式計(jì)算腫脹率：

腫脹率(%)=

(致炎后周長-致炎前周長)/致炎前周長×100%

結(jié)果可看出，在給藥后不同時(shí)間，與空白對(duì)照組相比，鼻炎滴劑用藥組和陽性對(duì)照組腫脹率都有顯著下降，說明鼻炎滴劑可有效抑制角叉菜所致大鼠足腫脹，見表4。表4鼻炎滴劑對(duì)角叉菜所致大鼠足腫脹的影響

2.2鼻炎滴劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱大鼠體溫的影響

取SD大鼠50只，體質(zhì)量150～170g,雌雄兼用，先測正常肛溫2～3次，隔30min測1次，連續(xù)2次測定體溫相差不應(yīng)大于0.2℃，取平均值為正常體溫。個(gè)體之間體溫相差不大于1.0℃。每只大鼠皮下注射傷寒、副傷寒甲、乙菌苗3mL/kg，每隔1h測量1次肛溫，待體溫升高0.6℃以上時(shí)(約1～4h)，取符合要求大鼠隨機(jī)均分5組，每組10只，立即開始給藥。即空白對(duì)照組(生理鹽水組)、鼻炎滴劑3個(gè)劑量組(高、中、低劑量組分別為4mL、2mL、1mL樣品液/kg，中、低劑量組分別將原液稀釋2、4倍，給藥體積均為4mL/kg，分別為小鼠半數(shù)致死量的1/5、1/10、1/20)、阿司匹林組。給藥后30、60、120min各測量體溫1次[5]。結(jié)果顯示，鼻炎滴劑3個(gè)劑量組對(duì)傷寒、副傷寒甲、乙菌苗所引起的大鼠實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱有顯著的解熱作用，見表5。表5鼻炎滴劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱大鼠體溫的影響

2.3鼻炎滴劑對(duì)離體兔耳血管灌流的影響

用ρ=0.4%戊巴比妥鈉靜脈麻醉(1mL/kg)將兔麻醉，俯臥位固定于兔臺(tái)上。剪去耳根部毛，于兔耳根凸面正中，在此血管處，順血管走向切開皮膚，約2～3cm即見兔耳靜脈。仔細(xì)分離兔耳動(dòng)脈約1cm長，并于其下穿二根線，結(jié)扎近心端，在此結(jié)扎點(diǎn)遠(yuǎn)側(cè)稍許作一“V”形切口，插入玻璃套管(或細(xì)小塑料管)予以結(jié)扎。用粗剪刀剪下全兔耳，用洛氏液灌注動(dòng)脈沖洗血管中存留的血液，直到流出的液體無色為止。

將兔耳固定在五角板上，以45°傾角把該板固定于鐵支架上，兔耳動(dòng)脈插管經(jīng)橡皮管與盛洛氏液瓶連接，并向瓶內(nèi)持續(xù)通O2，或95%的混合氣體。貯液瓶距兔耳動(dòng)脈約60cm左右，并使灌流液用38℃水浴器保溫，調(diào)節(jié)橡皮管螺旋夾，使由耳靜脈流出的灌流經(jīng)玻板角流下的速度約為30～40滴/min，記錄3min血流量，取恒定后的平均值。分別在不同的兔耳，于橡皮管近插管處緩慢注入洛氏液或供試藥液(高劑量組用原樣品液，中、低劑量組分別用洛氏液稀釋2、4倍)0.5mL/只，觀察并記錄給藥前及給藥后第1、3、5、10分鐘的滴數(shù)。待前一個(gè)藥物的作用消失后才能進(jìn)行下一個(gè)藥的試驗(yàn)[6]。結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，鼻炎滴劑3個(gè)劑量組和陽性對(duì)照組均能降低兔耳灌流量，提示其有收縮血管、降低毛細(xì)血管通透性、減輕水腫的作用，見表6。表6鼻炎滴劑對(duì)離體兔耳血管灌流的影響新晨

2.4鼻炎滴劑的體外抑菌試驗(yàn)[1,3]

2.4.1菌懸液的制備先將5種凍干菌株分別接種至血清肉湯中，37℃培養(yǎng)18h，從各增菌液中分別挑取一環(huán)細(xì)菌接種至5mL血清肉湯中，37℃18h;離心(2000r/min，10min)，棄去上清;以無菌生理鹽水洗滌，再次離心;各管沉淀以無菌生理鹽水稀釋。采用比濁法使5種菌懸液濃度均為1×105CFU/mL，備用。

2.4.2樣品稀釋采用試管系列稀釋法，將鼻炎滴劑的樣品用血清肉湯稀釋成6個(gè)不同的稀釋度，即1/5、1/10、1/20、1/40、1/80和1/160。

2.4.3細(xì)菌接種將比濁后的菌懸液接種至含藥肉湯中，接種量為50μL/管。同時(shí)設(shè)立陽性、陰性和空白對(duì)照組，其中陽性對(duì)照：不加藥，加菌;陰性對(duì)照：加80μg/mL的氨芐西林，加菌;空白對(duì)照：加藥，不加菌。

2.4.4細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果37℃溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察各細(xì)菌生長的情況。以澄清管所含藥物的最低濃度確定為最低抑菌濃度(MIC)。從澄清管中各挑取一環(huán)肉湯，分別劃線接種至不含藥物的平板上。37℃培養(yǎng)24h，觀察有無菌落形成以確定藥物的最低殺菌濃度(MBC)。

2.4.5抑菌試驗(yàn)結(jié)果鼻炎滴劑在體外對(duì)肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯桿菌、乙型溶血性鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌均有不同程度的抗菌作用，見表7。表7鼻炎滴劑的抗菌作用

3討論

鼻炎的炎癥表現(xiàn)以局部血管擴(kuò)張和毛細(xì)血管通透性增加為特征，本實(shí)驗(yàn)選擇慢性炎癥大鼠棉球肉芽腫、二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹和角叉菜所致大鼠足腫脹3個(gè)炎癥模型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示鼻炎滴劑有較好地抑制炎性水腫發(fā)生的作用;組胺在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中具有重要作用，它是目前確定的唯一能誘發(fā)出全部鼻變態(tài)反應(yīng)癥狀如鼻癢、噴嚏、鼻清涕及鼻塞等的炎癥介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑能有效拮抗組胺的致炎作用，減輕鼻黏膜毛細(xì)血管通透性增加，從而有利于鼻炎的治療;兔耳血管灌流量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑組可以降低兔耳灌流量，具有縮血管的作用;結(jié)合鼻炎滴劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱顯著的解熱作用及體外抑菌結(jié)果，提示鼻炎滴劑具有較好的抗炎、抑菌、收縮血管、減輕水腫的作用，從而為闡明鼻炎滴劑具有散風(fēng)、清熱、通竅功能，臨床用于風(fēng)熱蘊(yùn)肺型急、慢性鼻炎等疾患引起的鼻黏膜水腫、鼻塞提供了藥理學(xué)參考。鼻炎的炎癥表現(xiàn)以局部血管擴(kuò)張和毛細(xì)血管通透性增加為特征，本實(shí)驗(yàn)選擇慢性炎癥大鼠棉球肉芽腫、二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹和角叉菜所致大鼠足腫脹3個(gè)炎癥模型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示鼻炎滴劑有較好地抑制炎性水腫發(fā)生的作用;組胺在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中具有重要作用，它是目前確定的唯一能誘發(fā)出全部鼻變態(tài)反應(yīng)癥狀如鼻癢、噴嚏、鼻清涕及鼻塞等的炎癥介質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑能有效拮抗組胺的致炎作用，減輕鼻黏膜毛細(xì)血管通透性增加，從而有利于鼻炎的治療;兔耳血管灌流量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻炎滴劑組可以降低兔耳灌流量，具有縮血管的作用;結(jié)合鼻炎滴劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性發(fā)熱顯著的解熱作用及體外抑菌結(jié)果，提示鼻炎滴劑具有較好的抗炎、抑菌、收縮血管、減輕水腫的作用，從而為闡明鼻炎滴劑具有散風(fēng)、清熱、通

【參考文獻(xiàn)】

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