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1試驗方法

1.1氣相色譜條件色譜柱：HP-5毛細管色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm）；固定液：（5%苯基）-甲基聚硅氧烷；程序升溫：柱溫80℃保持3min，升溫速率6℃/min，終止溫度150℃保持3min；氣化室溫度：150℃；檢測器溫度：150℃；進樣方式：分流進樣，分流比5:1；柱流速：1.5mL/min，氫氣：30mL/min；空氣：300mL/min。

1.2質(zhì)譜條件傳輸線：250℃，電子電離源溫度：200℃，溶劑延遲時間：3min；掃描范圍：50~600，全掃描。

1.3甜蜜素衍生物定性試驗采用氣相色譜和質(zhì)譜2種方法定性，相互確證了甜蜜素衍生物中的目標(biāo)峰和干擾峰。氣相色譜定性采用對本底檢測和本底加標(biāo)檢測，然后對比目標(biāo)峰和干擾峰的保留時間以及峰面積的變化達到定性目的。質(zhì)譜法定性采用ThermoPolarisQ氣質(zhì)聯(lián)用儀離子全掃描方法定性，通過NIST（2005）譜庫對質(zhì)譜圖進行自動檢索。

1.4繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線甜蜜素標(biāo)樣處理完后，立即將標(biāo)準(zhǔn)提取液進樣1μL~5μL于氣相色譜儀中，即甜蜜素含量分別為1μg、2μg、3μg、4μg、5μg，根據(jù)響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5進樣時間對回收率的影響對質(zhì)量濃度為1mg/L標(biāo)樣進行分析，每隔8h進樣1次，計算回收率，繪制環(huán)己醇亞硝酸酯回收率隨時間變化趨勢圖。

2結(jié)果與分析

2.1甜蜜素衍生物定性甜蜜素在硫酸介質(zhì)中、低溫狀態(tài)下與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇，環(huán)己醇在酸性條件下又繼續(xù)與亞硝酸鈉反應(yīng)生成環(huán)己醇亞硝酸酯。因此，我們推斷甜蜜素衍生物的干擾物可能為環(huán)己醇，目標(biāo)物環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定，會隨著時間的推移慢慢轉(zhuǎn)化成環(huán)己醇，造成甜蜜素檢測結(jié)果的不穩(wěn)定和重復(fù)性較差等問題。為了確定干擾物的成分，我們首先將環(huán)己醇標(biāo)樣加入之前的正己烷提取物中，發(fā)現(xiàn)干擾物峰面積明顯增加，出峰時間保持一致。正己烷提取物中加入環(huán)己醇前后對照見圖1。然后用氣質(zhì)聯(lián)用儀對干擾物定性，NIST（2005）譜庫自動檢索結(jié)果顯示，SI值為912，RSI值為933，與環(huán)己醇匹配率為83%。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制從色譜圖（圖1）上可以看出，甜蜜素衍生產(chǎn)物呈2個色譜峰，分別為目標(biāo)峰和干擾峰，目標(biāo)峰即環(huán)己醇亞硝酸酯。標(biāo)樣處理完成后，將正己烷提取產(chǎn)物立即用氣相色譜儀分析，以目標(biāo)峰峰面積計算，做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線在1mg/L~5mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9983，如圖2，且回收率在90%以上。

2.3環(huán)己醇亞硝酸酯回收率隨時間的變化趨勢為了研究時間的變化和甜蜜素2個衍生產(chǎn)物之間轉(zhuǎn)化的規(guī)律，每隔8h分析一次標(biāo)樣，濃度為1mg/L，通過目標(biāo)峰的峰面積計算環(huán)己醇亞硝酸酯的回收率。環(huán)已醇亞硝酸酯回收率隨時間的變化趨勢見圖3。結(jié)果顯示，隨著時間的推移，目標(biāo)峰逐漸變小，干擾峰逐漸變大，環(huán)己醇亞硝酸酯的回收率越來越低。通過圖3繪制的曲線可以看出，在最初的24h之內(nèi)，目標(biāo)物回收率相對穩(wěn)定，在85%~95%之間，受干擾物的影響較小；到了24h之后，目標(biāo)物就會逐漸轉(zhuǎn)化成干擾物，回收率明顯減少；到了72h，回收率基本為零。因此，檢測食品中甜蜜素含量時，應(yīng)該在樣品處理完24h內(nèi)完成檢測，才能保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3結(jié)論

國家標(biāo)準(zhǔn)方法中規(guī)定的甜蜜素的檢測方法為，在硫酸介質(zhì)中甜蜜素與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，通過環(huán)己醇亞硝酸酯的色譜峰對甜蜜素進行定性和定量，標(biāo)準(zhǔn)中并未提出檢測時間的問題。但實際工作中，我們發(fā)現(xiàn)甜蜜素衍生產(chǎn)物在色譜圖上呈現(xiàn)2個色譜峰，除了環(huán)己醇亞硝酸酯外還有一個干擾峰，而且環(huán)己醇亞硝酸酯會隨著時間的變化逐漸減少，影響了檢測結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。本文通過研究，首先定性了甜蜜素衍生物的2個色譜峰，即目標(biāo)峰為環(huán)己醇亞硝酸酯，干擾峰為環(huán)己醇，生成的環(huán)己醇亞硝酸酯會逐漸轉(zhuǎn)化成環(huán)己醇。其次通過對不同時間段的目標(biāo)產(chǎn)物回收率進行分析，表明樣品處理完之后應(yīng)在24h之內(nèi)上機檢測，才能確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。因此本文對國標(biāo)中甜蜜素檢驗方法的完善和發(fā)展具有一定意義，為今后甜蜜素檢驗的創(chuàng)新奠定基礎(chǔ)。

作者：趙小珍龐小剛張洪單位：山西省分析科學(xué)研究院