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摘要：目的研究乳腺良、惡性腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維含量，分析良惡性乳腺腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維的表達(dá)差異。方法對(duì)解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心2014年5月-2015年8月49例良、惡性乳腺腫瘤標(biāo)本以醛品紅法染色，采用顯微圖像分析系統(tǒng)(LeciaQ500MC；Cambridge，UK)定量分析切片細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維面積，比較其在良惡性腫瘤中含量差異。結(jié)果惡性組26例，年齡35~71(46.5±7.7)歲，良性組23例，年齡31~72(38.3±11.9)歲。惡性組主要為浸潤性導(dǎo)管癌(n=18)，良性組主要為纖維腺瘤(n=12)。良性腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維面積為(9257.5±2392.8)μm2，惡性組為(14384.4±2853.7)μm2，惡性組腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維含量較良性組腫瘤升高(P＜0.05)。結(jié)論良、惡性乳腺腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維含量存在較大差異，惡性病例中彈力纖維含量升高。

關(guān)鍵詞：乳腺腫瘤；彈力纖維；細(xì)胞外基質(zhì)；病理學(xué)

細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)結(jié)構(gòu)和生物力學(xué)性能的變化是影響乳腺病變發(fā)展的重要因素，其成分變化從結(jié)構(gòu)支持到調(diào)節(jié)信號(hào)通路等多方面影響乳腺腫瘤的進(jìn)展[1-3]。在細(xì)胞外基質(zhì)中，彈力纖維分子間通過賴氨酸殘基參與的交聯(lián)形成富于彈性的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可激活多類信號(hào)通路，導(dǎo)致細(xì)胞增殖和侵襲能力增加[4-5]。本課題組前期研究表明，細(xì)胞外基質(zhì)中膠原纖維的變化與剪切波彈性模量值呈正相關(guān)。隨著彈力纖維在腫瘤進(jìn)展中的作用研究逐漸深入，本文對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中的彈力纖維做定量研究，以提高細(xì)胞外基質(zhì)成分在腫瘤生物學(xué)進(jìn)程中作用的認(rèn)識(shí)。

資料和方法

1資料來源

收集2014年5月-2015年8月在解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心行超聲引導(dǎo)下活檢確診為乳腺癌和乳腺良性腫瘤的患者49例。納入標(biāo)準(zhǔn)：女性患者在本院行穿刺病理檢查有明確診斷；排除標(biāo)準(zhǔn)：患者診斷前有其他器官腫瘤病史。

2穿刺活檢方法

采用Philips公司IU22超聲診斷儀，探頭頻率為12~5MHz，觀察并記錄病灶常規(guī)超聲特征，對(duì)病灶行超聲引導(dǎo)下穿刺活檢，留取足量腫瘤組織待查。依據(jù)病理結(jié)果將入組患者分為良性組與惡性組。

3彈力纖維染色與定量切片

脫蠟后使用酸化高錳酸鉀氧化5min，流水沖洗；用2%草酸漂白1min后流水沖洗；入醛品紅液染色6min左右，使用75%酒精洗滌至切片不再脫色為止，橙黃G滴染1s后水洗，脫水、透明、封片后置于光學(xué)顯微鏡下觀察[6]。隨機(jī)選取5張高倍鏡視野，采用顯微圖像分析系統(tǒng)(LeciaQ500MC；Cambridge，UK)定量分析切片內(nèi)彈性纖維所占面積，求取彈性纖維面積算術(shù)平均數(shù)[7]。4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料比較選用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料對(duì)比選用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1兩組基線特征比較

良性組23例，年齡31~72(38.3±11.9)歲；惡性組26例，年齡35~71(46.5±7.7)歲。惡性組平均年齡較大；兩組患者病灶均以低回聲為主，良性組中等回聲病灶較多(n=5)，而惡性組中極低回聲病灶較多(n=7)；良性組中纖維腺瘤最多(n=12)，而惡性組中浸潤性導(dǎo)管癌占絕大多數(shù)(n=18，69.2%)。見表1

2兩組細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維含量比較

26例惡性病灶細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維面積達(dá)6776.3~20069.9(14384.4±2853.7)μm2，23例良性病灶細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維面積達(dá)4760.0~13950.7(9257.5±2392.8)μm2，惡性組面積顯著高于良性組(P＜0.05)。

3典型病例

52歲女性，左乳外上象限極低回聲結(jié)節(jié)(BI-RADS5類)，結(jié)節(jié)形態(tài)不規(guī)則，邊界不清，周邊有厚聲暈，呈毛刺樣，患者行超聲引導(dǎo)下穿刺活檢，樣本采用醛品紅法染色，采用顯微圖像分析系統(tǒng)定量計(jì)算基質(zhì)中彈力纖維表達(dá)面積為17939.4μm2；32歲女性，左乳內(nèi)上象限低回聲結(jié)節(jié)(BI-RADS3類)，結(jié)節(jié)邊界清楚，形態(tài)規(guī)則，基質(zhì)中彈力纖維表達(dá)面積為7282.5μm2(見圖1~圖2)。

討論

近年來，多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)成分對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移起到極為重要的調(diào)控作用，細(xì)胞外基質(zhì)各成分的分泌、沉積和調(diào)控機(jī)制等研究備受關(guān)注[8-9]。既往本課題組研究認(rèn)為，腫瘤發(fā)生過程中伴隨著膠原交聯(lián)，多種蛋白表達(dá)增多，腫瘤的硬度不斷增加，而細(xì)胞外基質(zhì)成分的含量變化與腫瘤硬度有直接關(guān)系[10]。某些腫瘤成瘤過程中出現(xiàn)纖維組織增生，尤其是在乳腺癌中更為明顯，膠原蛋白和彈力纖維在其中發(fā)揮重要作用。乳腺癌進(jìn)展過程中，TGF-β可通過調(diào)高轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控彈力纖維在基質(zhì)中的分泌，促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換，增加乳腺癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[11-12]。既往有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)成瘤過程中彈力纖維的含量增加了70%，而其中絕大部分是由基質(zhì)外細(xì)胞產(chǎn)生[13]。這些沉積在基質(zhì)外的彈力纖維與膠原蛋白等通過賴氨酰氧化酶(LOX)催化、交聯(lián)，改變了組織彈性和基質(zhì)結(jié)構(gòu)，作用于腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移的各個(gè)過程[11]。本實(shí)驗(yàn)乳腺癌組中彈力纖維沉積明顯增高，而絕大部分沉積于基質(zhì)中，與之前的研究結(jié)果相似[14-15]，而通過顯微圖像分析系統(tǒng)定量對(duì)比人類良、惡性乳腺腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中的彈力纖維沉積，尚屬首次。乳腺惡性腫瘤的剪切波彈性模量值要遠(yuǎn)高于良性腫瘤[16]。有學(xué)者認(rèn)為細(xì)胞外基質(zhì)中的彈力纖維含量變化是影響腫瘤硬度的主要原因。因此推測本實(shí)驗(yàn)中彈力纖維的增高可能是影響惡性腫瘤硬度增加的機(jī)制之一。同時(shí)我們注意到，本研究中數(shù)例良性病灶的彈力纖維面積超過個(gè)別惡性病例，其中2例硬化性腺病病灶的彈力纖維面積均超過惡性組平均分布面積，2例纖維腺瘤病灶的彈力纖維面積高于惡性組平均分布面積，結(jié)合超聲影像學(xué)數(shù)據(jù)上述幾例病灶直徑均較大，形態(tài)尚規(guī)則，病灶周圍腺體較豐富。有研究顯示病灶病理分型和病灶大小均與乳腺病灶硬度具有相關(guān)性[5]，可能的原因是病灶體積增大，其基質(zhì)中彈力纖維等分布增高，而luminalB型乳腺癌硬度較luminalA型普遍增高[17]；同時(shí)原位癌硬度相對(duì)較小[18]，可能是由于基質(zhì)彈力纖維沉積較少所致。由此可見，部分良性病灶基質(zhì)中彈力纖維分布面積可能高于惡性病灶，由于本研究中各病理分型樣本量偏少，需要更深入的探索研究。本研究是針對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維的基礎(chǔ)性研究，入組病例年齡在兩組間存在差異，因此，兩組間比較可能存在一定的偏倚。本研究中定量比較了乳腺腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)中的彈力纖維含量變化，為深入研究細(xì)胞外基質(zhì)中彈力纖維對(duì)于腫瘤生物學(xué)行為的調(diào)控機(jī)制打下了較好的基礎(chǔ)。

作者：李亞帥 王知力 何艷 單位：解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心