本站小編為你精心準(zhǔn)備了呼吸道合胞病毒感染的研究參考范文，愿這些范文能點(diǎn)燃您思維的火花，激發(fā)您的寫作靈感。歡迎深入閱讀并收藏。

［摘要］呼吸道合胞病毒感染是常見的呼吸道感染性疾病，嬰幼兒和老年人感染后可引起嚴(yán)重癥狀。動(dòng)物模型是研究RSV感染疾病特征，評(píng)價(jià)治療藥物或預(yù)防性疫苗有效性的重要方面，不同的動(dòng)物模型反應(yīng)了疾病感染的不同方面，應(yīng)基于研究目的和科學(xué)假設(shè)選擇適合的動(dòng)物模型，本文主要對(duì)RSV感染的各動(dòng)物模型的優(yōu)勢和局限性進(jìn)行總結(jié)，為新藥的研發(fā)提供參考。

［關(guān)鍵詞］呼吸道合胞病毒;動(dòng)物模型;嚙齒類;炎癥

呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus，RSV)屬副黏病毒，是一種單鏈、負(fù)股、有包膜的RNA病毒，包膜上有F蛋白和G蛋白，F(xiàn)蛋白為融合蛋白，感染細(xì)胞后產(chǎn)生獨(dú)特的細(xì)胞融合病變，G蛋白為吸附性蛋白，可與細(xì)胞表面的受體結(jié)合。RSV感染后首先于鼻咽上皮細(xì)胞中增殖，進(jìn)而擴(kuò)散至下呼吸道，不形成病毒血癥，RSV能引起嬰幼兒，特別是2～6個(gè)月的嬰兒炎癥呼吸道疾病，可累及細(xì)支氣管和支氣管，出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難等癥狀，嚴(yán)重者發(fā)生心力衰竭導(dǎo)致死亡，RSV在嬰兒引起嚴(yán)重呼吸道病變的機(jī)制尚不清楚，可能與免疫病理作用相關(guān)，RSV也可在年老者和免疫功能低下者導(dǎo)致嚴(yán)重感染。

1兒童感染RSV的流行病學(xué)

根據(jù)WHO估算數(shù)據(jù)，全球每年約有6400萬兒童感染RSV，其中約有16萬兒童死于RSV感染。國內(nèi)有關(guān)RSV的多中心、大樣本的流行病學(xué)研究較少，多為RSV相關(guān)毛細(xì)支氣管炎和肺炎的單中心、小樣本的研究。2000年11月—2006年3月，首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院采集因急性呼吸道感染就診的門診及住院的患兒咽拭子或鼻咽分泌物標(biāo)本10048份，檢測結(jié)果顯示RSV是冬春季嬰幼兒下呼吸道感染的主要病毒病原［2］，2013年，對(duì)279例急性呼吸道感染患兒進(jìn)行呼吸道病毒病原體檢測，發(fā)現(xiàn)RSV陽性患兒約占呼吸道感染患兒的26．5%，與發(fā)達(dá)國家的RSV下呼吸道感染率相似。

2抗RSV藥物研究進(jìn)展

目前尚無針對(duì)RSV感染的疫苗上市，曾有以福爾馬林滅活呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗(F1-RSV)預(yù)防接種的嬰幼兒，自然感染RSV后較之未接種疫苗感染者表現(xiàn)出更為嚴(yán)重的支氣管痙攣性肺炎，并造成死亡。1998年美國FDA批準(zhǔn)人源化抗RSV單克隆IgG抗體palivizumab(帕利珠單抗)用于預(yù)防RSV感染被動(dòng)免疫;國內(nèi)目前尚無針對(duì)RSV感染的特效藥物上市，臨床主要應(yīng)用廣譜抗病毒藥物利巴韋林以及對(duì)癥治療。

3RSV感染動(dòng)物模型

除作用機(jī)制研究和體外活性研究外，科學(xué)可靠的動(dòng)物模型試驗(yàn)是藥物非臨床有效性評(píng)價(jià)的重要依據(jù)之一。理想的RSV感染動(dòng)物模型應(yīng)包含人感染RSV后的主要病理性改變和特點(diǎn)，包括病毒復(fù)制增殖、臨床癥狀、肺和支氣管的組織病理學(xué)改變等。另外RSV感染癥狀的嚴(yán)重程度往往與年齡相關(guān)，年齡越小則臨床表現(xiàn)癥狀越重。另有研究表明，嬰兒感染RSV可能與成年后的哮喘發(fā)作有密切關(guān)系。由于解剖結(jié)構(gòu)、種屬差異，人RSV感染的病理生理特點(diǎn)在單一的動(dòng)物模型中無法完全復(fù)制，以下幾種動(dòng)物模型從RSV感染的不同側(cè)面反映了疾病的特點(diǎn)。

3．1黑猩猩

由于黑猩猩的基因與人高度同源，多是非臨床動(dòng)物模型的最佳選擇。黑猩猩經(jīng)鼻接種RSV，鼻腔和氣管分泌物中可檢測到較高的病毒滴度，可見咳嗽、噴嚏、鼻涕等上呼吸道感染癥狀，一般不引起下呼吸道病變。局限性:由于黑猩猩價(jià)格昂貴，數(shù)量稀少以及動(dòng)物保護(hù)等因素的制約，不適于藥物的臨床前評(píng)價(jià)。

3．2綿羊

幼年綿羊?qū)RSV較易感，新生綿羊經(jīng)氣管接種hRSV，病毒可大量復(fù)制，動(dòng)物可見咳嗽等上呼吸道感染癥狀，病理學(xué)檢查結(jié)果顯示為毛細(xì)支氣管炎癥，呼吸道上皮細(xì)胞和肺泡細(xì)胞凋亡增多，以及間質(zhì)性肺炎改變。由于綿羊呼吸道結(jié)構(gòu)與人相似，動(dòng)物體型較大，可進(jìn)行肺功能監(jiān)測。局限性:綿羊不是常用的動(dòng)物模型，相應(yīng)的市售檢測試劑較少;所需飼養(yǎng)環(huán)境、飼料較特殊，難以大量用于非臨床研究。

3．3棉鼠(cottonrat，Sigmodonhispidus)

1971年Dreizin首次報(bào)道了棉鼠作為hRSV病毒感染的動(dòng)物模型，棉鼠感染hRSV后，病毒主要在肺部和下呼吸道復(fù)制擴(kuò)增，病理學(xué)檢查可見輕到中度細(xì)支氣管炎或肺炎、氣道上皮細(xì)胞脫落和肺不張，上呼吸道感染癥狀較明顯，相關(guān)細(xì)胞因子變化不明顯。棉鼠是疫苗、抗病毒藥和單抗(如:帕利珠單抗)有效性評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物模型。局限性:棉鼠缺少近交系以及基因靶向研究品種，市售檢測試劑較少，另外棉鼠適應(yīng)環(huán)境能力較差，需專人飼養(yǎng)，成本較高。

3．4小鼠

1979年P(guān)rince首次報(bào)道小鼠作為hRSV感染動(dòng)物模型，使用較多的為BALB/C小鼠，經(jīng)鼻腔滴鼻感染RSV滴度為105～107PFU，動(dòng)物可見明顯下呼吸道炎癥改變，氣管灌注液中部分細(xì)胞因子和CC/CXC趨化因子如TNF-α，IL-6，IFN-γ，MIP-1α/CCL3，RANTES/CCL5和KC明顯增加，組織病理學(xué)可見細(xì)支氣管周和細(xì)血管周圍單核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)滲出或間質(zhì)性肺炎。小鼠感染hRSV亞型不同(如Along，A2和臨床分離株等)癥狀不同。另外，年齡對(duì)小鼠呼吸道感染嚴(yán)重程度未見明顯影響。小鼠感染RSV后出現(xiàn)呼吸頻率加快，并伴有氣道阻塞和氣道高反應(yīng)性，且氣道的高反應(yīng)性會(huì)持續(xù)較長時(shí)間，與兒童感染RSV很相似，但趨化因子受體CCR1和CXCR2缺乏的小鼠可見氣道高反應(yīng)性降低。小鼠是藥理毒理學(xué)研究最常用的模型動(dòng)物之一，遺傳背景清楚，品系較多，并可通過基因靶向轉(zhuǎn)染或敲除技術(shù)滿足特定試驗(yàn)需求。

動(dòng)物體積小、生長速度快、飼養(yǎng)成本低，市售檢測試劑較多，基于上述原因，目前小鼠在RSV感染動(dòng)物模型中應(yīng)用最多。局限性:小鼠與人體免疫反應(yīng)差異較大，小鼠無IL-8，中性粒和淋巴細(xì)胞偏低，受體辨識(shí)類型不同，白細(xì)胞表面表達(dá)的分化抗原群不同，小鼠解剖結(jié)構(gòu)缺少細(xì)支氣管和復(fù)雜氣道。另外，RSV病毒在小鼠肺臟僅能低水平復(fù)制，不造成真正的感染，不能作為抗病毒宿主防御和炎癥模型。有報(bào)道將裸鼠作為RSV感染模型，鼻腔緩慢滴入RSVA2株病毒液2×106PFU•mL－1，感染后裸鼠d2病毒滴度逐漸升高，d3達(dá)峰值為(6．59±0．62)lgPFU•g－1，病毒至d9滴度仍較高，較BALB/C小鼠病毒高復(fù)制水平持續(xù)時(shí)間長，可能更適合于抗RSV藥物有效性的評(píng)價(jià)。

3．5牛

1970年Mfpaccaud等首先報(bào)道了牛感染bRSV的情況，牛感染RSV與發(fā)病年齡有相關(guān)性，發(fā)病年齡越小，癥狀越重，與人較類似。感染癥狀包括上下呼吸道感染癥狀，包括流涕、咳嗽、呼吸急促、喘息、高磷酸血癥和血氧不足，也可見發(fā)熱、厭食和活動(dòng)減少，但牛bRSV與人RSV病毒同源性較低，無法作為抗人RSV藥物研究的非臨床研究動(dòng)物模型。

3．6豚鼠、樹鼩、雪貂

曾有研究報(bào)道，豚鼠、雪貂和樹鼩均可經(jīng)鼻腔接種RSV導(dǎo)致感染，豚鼠和樹鼩呼吸道癥狀不明顯，肺內(nèi)病毒復(fù)制水平較低，肺部呈間質(zhì)性肺炎或輕微炎癥改變，雪貂鼻部病毒滴度較高，以上3種動(dòng)物給藥操作困難，缺乏免疫指標(biāo)診斷試劑以及近交品系，故應(yīng)用較少。

4結(jié)語

以上介紹的幾種動(dòng)物模型在RSV感染的癥狀、病毒復(fù)制水平、炎癥因子變化、病理學(xué)改變各有特點(diǎn)，多用于研究疾病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制和特征，也用于藥物非臨床藥效學(xué)評(píng)價(jià)。藥效學(xué)動(dòng)物模型對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的可操作性也有較高要求，另外動(dòng)物的飼養(yǎng)成本、檢驗(yàn)試劑的可及性也是其廣泛應(yīng)用的限制因素。對(duì)于抗RSV藥物來說，病毒復(fù)制、相關(guān)炎癥因子改變、病理學(xué)異常是疾病模型中應(yīng)重點(diǎn)考察的指標(biāo)，單一的動(dòng)物模型往往不能滿足所有的研究目的，建議使用不同的動(dòng)物模型，并依據(jù)藥物的作用機(jī)制和特點(diǎn)有針對(duì)性地考察。同時(shí)為獲得可靠的可供評(píng)價(jià)的數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物須有一定的樣本量，方便進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的比較分析。另外，選擇合適的陽性對(duì)照藥物，有利于提示和闡述受試藥物的預(yù)期臨床定位和臨床價(jià)值。最后，需要指出的是，同其他抗病毒藥物一樣，在缺乏理想動(dòng)物模型的情況下，清晰明確的作用機(jī)制和體外活性研究也是預(yù)測人體有效性的重要依據(jù)，在藥物研發(fā)和注冊(cè)審評(píng)中對(duì)藥物有效性的評(píng)價(jià)需要綜合各方面的研究結(jié)果。

［參考文獻(xiàn)］

［1］鄧潔，錢淵，朱汝南．2000年冬—2006年春北京地區(qū)急性呼吸道感染患兒中呼吸道合胞病毒的監(jiān)測［J］．中華兒科雜志，2006，44(12):924－927.

作者：單曉蕾；孫濤；于春榮；王慶利 單位：國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品審評(píng)中心